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异柠檬酸裂解酶(Isocitrate Lyase，ICL)是乙醛酸循环中的关键酶。在微生物中，异柠檬酸裂解酶的作用机理是：当能量储备充足时，异柠檬酸裂解酶催化产生琥珀酸和乙醛酸；当微生物缺乏葡萄糖时，二氧化碳会被作为唯一的碳源参与到乙醛酸循环中来合成胞内物质，从而使微生物在不利的环境中生存下来。异柠檬酸裂解酶对褐环粘盖牛肝菌分泌草酸，调节环境 pH、改善磷营养、提高生物抗病机制、改善土壤环境有着重要的作用。异柠檬酸裂解酶结构预测及基因序列的分析，为研究异柠檬酸裂解酶的酶学性质及代谢机理奠定理论基础，对于研究褐环粘盖牛肝菌菌丝的生长和菌根的功能作用有着重要的意义。该试验采用核酸测序技术、cDNA末端快速扩增技术得到了异柠檬酸裂解酶的 cDNA及 DNA序列，分析了氨基酸序列，并预测了异柠檬酸裂解酶的空间结构。 结果表明：根据保守序列设计简并引物，以褐环粘盖牛肝菌总 RNA为模板，通过 PCR扩增获得大小为656bp的 cDNA序列，采用3’RACE和5’RACE技术获得了全长为1852bp的 cDNA序列，包含1620bp的开放阅读框，编码539个通读的氨基酸序列。其核苷酸序列与粉孢革菌、双色蜡蘑、灰盖鬼伞、裂褶菌和双孢蘑菇的相似性分别为76％、73%、72%、72%、72%，氨基酸序列相似性分别为88%、88%、82%、81%、84%，并对 ICL进行生物信息学分析；PCR扩增得到 DNA序列，约1928bp，分析 DNA序列，发现它与 ICL编码框序列基本一致，且该段基因含有4个内含子，长度分别为55bp、49bp、57bp和49bp；构建了 pET28-ICL表达质粒，为后续研究异柠檬酸裂解酶的酶学特性奠定了基础。