目的本论文以年轻和衰老肌腱组织来源的间充质干细胞（TSPCs）为主要研究对象,旨在分析叉头框P1基因（FOXP1）与TSPCs衰老的相关性,并进一步研究FOXP1对TSPCs衰老相关的自我更新、迁移和成肌腱分化能力的影响,并深入探讨其作用机制。方法1.选取年轻（6月龄）和衰老（24月龄）大鼠跟腱组织,并提取TSPCs,利用克隆形成实验（CFU）检测其克隆形成能力,利用流式细胞检测TSPCs细胞表面抗原的表达,并分别运用Oil red染色、Alizarin red染色、Alican染色分别检测TSPCs成脂肪、成骨、成软骨分化潜能。2.β-gal染色法检测细胞衰老情况,运用蛋白免疫印迹技术（Western blot,WB）及实时定量 PCR 技术（Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测年轻及衰老TSPCs中FOXP1及p16INK4的表达情况。3.对衰老TSPCs使用携带FOXP1基因片段的慢病毒进行转染,对年轻TSPCs使用FOXPl-siRNA进行转染,利用Western blot检测转染效率。转染后各组细胞的衰老情况通过β-gal染色测定,p16INK4的表达利用Western blot检测。细胞自我更新能力利用克隆形成实验、CCK8细胞增殖实验进行评价。运用划痕实验对细胞的迁移能力进行检测。运用qRT-PCR对肌腱相关基因Tnmd、Scx、Colla1的表达进行检测。4.利用Western blot对慢病毒干扰前后TSPCs中细胞周期相关蛋白E2F1、pRB和Cyclin D1的表达进行检测。结果1.大鼠肌腱源干细胞TSPCs呈现成纤维细胞样形态,体外培养7天后形成克隆团,TSPCs表达间充质干细胞表面标记物CD44和CD90.1,造血干细胞标记物CD34、白细胞表面标记物CD45和内皮细胞标记物CD31均为阴性。在成脂肪诱导完全培养基中培养15天后,经Oil red染色证实形成脂质滴。成骨分化诱导后,Alizarin red染色证明大多数细胞在诱导20天后形成矿化钙沉积。TSPCs在成软骨诱导培养基中行微团培养和诱导,培养20天后用Alican染色法证实了酸性粘多糖的形成,提示TSPCs的成软骨分化。2.β-gal染色显示衰老TSPCs中β-gal阳性细胞数明显增多,western blot结果显示衰老TSPCs中衰老标志物p16INK4蛋白水平显著升高。qRT-PCR和western blot显示衰老TSPCs的FOXP1 mRNA和蛋白质水平显著降低。3.LV-FOXP1转染后明显增加衰老TSPCs中FOXP1的蛋白水平,Western blot结果显示LV-FOXP1显著提高了衰老TSPCs中FOXP1的蛋白水平。β-gal衰老染色显示过表达FOXP1后可明显减少β-gal阳性细胞的数量。此外,Western blot显示LV-FOXP1转染后同样抑制衰老标记物p16INK4的表达。FOXP1-siRNA转染年轻TSPCs后,提高了β-gal阳性细胞数目百分比。FOXP1的敲低也提高了p16INK4在年轻TSPCs中的表达。此外,LV-FOXP1转染后显著增强衰老TSPCs的克隆形成及增殖能力。划痕实验显示过表达FOXP1后可促进衰老TSPCs的迁移。qRT-PCR结果显示过表达FOXP1后可增加衰老TSPCs中肌腱相关基因TNMD、SCX、Colla1的表达。4.Western blot结果显示衰老TSPCs中E2F1、pRB和Cyclin D1的表达明显下降,而LV-FOXP1转染后可显著提高这些细胞周期相关蛋白的水平。结论1.FOXP1在衰老TSPCs中表达显著下降,其表达与TSPCs衰老相关。2.过表达FOXP1可明显抑制TSPCs的衰老,并增强TSPCs自我更新、迁移及分化能力。FOXP1可作为对抗肌腱老化的一个分子靶点。3.FOXP1通过细胞周期调控TSPCs的衰老。