喹赛多是喹嗯啉类新品种,对畜禽及鱼类均具有广谱抗菌、促生长和提高饲料利用率的作用,且与同类药物相比毒性小、安全性高,具有广阔的开发应用前景。作为食品动物用药,食品安全性是重要的研究内容之一。残留消除研究是食品动物用药安全性评价的核心内容之一,也是确定残留标志物、残留靶组织及制定休药期等食品安全性标准的直接科学依据。本研究在放射性示踪研究的基础上,按推荐剂量和生产条件长期饲喂喹赛多,开展喹赛多及其主要代谢物在猪、鸡和鱼体内的残留消除研究,进一步确证喹赛多在食品动物体内的残留标志物与靶组织,提出休药期标准,为喹赛多的食品残留监控提供明确的监控对象与技术标准。同时考察喹赛多及其代谢物在环境中降解规律,为合理评价喹赛多的环境安全性提供科学依据。1.喹赛多及其主要代谢物在猪、鸡和鱼可食性组织中残留检测方法的建立多残留检测方法的建立：通过对样品前处理及液相色谱条件的优化,确定最佳条件,建立了喹赛多及其5种主要代谢物(Cy1、Cy2、Cy4、Cy6、Cy12)在猪、鸡和鱼可食性组织中的高效液相色谱残留检测方法。样品先用1%偏磷酸10%乙腈50%甲醇提取,经HLB固相萃取小柱净化浓缩,再用三氯甲烷反萃HLB柱的洗脱液,达到进一步除杂的效果,用HPLC在320nm紫外波长下测定。结果显示,猪、鸡和鱼可食性组织中,Cyx、Cy1、Cy2、Cy6和Cy12在肝脏、肾脏、肌肉和脂肪(或皮脂)中的LOQ均为20μg/kg; Cy4在四种组织中的LOQ均为40μg/kg。在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于68.0%-79.5%之间,变异系数≤9.6%。脱二氧喹赛多单残检测方法的建立：通过对样品前处理及液相色谱条件的优化,建立了脱二氧喹赛多在猪、鸡和鱼可食性组织中的高效液相色谱残留检测方法。2g组织用乙酸乙酯提取两次,合并提取液氮气吹干,用HPLC在280nm紫外波长下测定。结果显示,在猪、鸡和鱼可食性组织中,Cyl的最低定量限为20μg/kg,在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率为71.4%～78.4%之间,变异系数≤10%。2.喹赛多在猪、鸡和鱼体的残留消除研究健康三元杂交猪25头、1日龄科宝肉鸡30只和健康鲤鱼50尾分别连续饲喂含喹赛多150mg/kg(鱼饵料中喹赛多含量为100mg/kg)的加药饲料60天、40天和30天,于停药后不同时间点宰杀动物,取肝脏、肾脏、肌肉、脂肪(皮脂或皮肤)和鱼肠道,分别按上述良好总方法测定喹赛多及其代谢物的残留量。结果如下：猪：停药6h,肝脏和肾脏中均检出喹赛多、脱二氧喹赛多和喹噁啉-2-羧酸,残留量为21.8μg/kg-55.0μg/kg。其中脱二氧喹赛多在肾脏中持续3天可检出,喹赛多和喹噁啉-2-羧酸在肝肾中持续时间均为停药后6h或1d。肌肉中停药6h,能检测到喹赛多和喹噁啉-2-羧酸,残留量分别为27.5μg/kg和37.6μg/kg;停药1d后仅能检测到喹噁啉-2-羧酸,之后未检出喹赛多相关残留物。脂肪中停药6h,仅检出少量的喹赛多和N’-(喹噁啉-2-甲基)-氰乙酰肼,残留量分别为22.2μg/kg-34.6μg/kg,之后未检出相关残留物。结果证明,喹赛多在猪体内的残留量低、残留消除迅速,残留标志物为脱二氧喹赛多,残留靶组织为肾脏。结合毒理学研究和代谢研究结果,推算出喹赛多在猪肾脏的最高残留限量为32.4mg/kg,以此为依据,喹赛多在猪的休药期为零天。鸡：停药6h,肝脏中检测到了四种化合物(Cyx, Cy1, Cy6, Cy12),残留量为24.7-49.7μg/kg。Cy1和Cy6在停药24h后不可检出,喹赛多和Cy12仅停药6h可检出,之后不可检出。肾脏中检出五种化合物(Cyx, Cy1, Cy4, Cy6,Cy12),残留量为20.5-53.6μg/kg。Cy1和Cy6分别于停药3d和1d后消除至检出限以下,其余残留物均仅在停药6h可检出,之后消除完全。肌肉和脂肪中在停药6h仅检测到了Cy12,残留量在24.7-53.6μg/kg范围内。停药12h,脂肪中检出少量Cy4,而肌肉中检测不到任何化合物。结合毒理学研究和代谢研究结果,推算出喹赛多在鸡肾脏的最高残留限量为32.4mg/kg,以此为依据,喹赛多在鸡的休药期为零天。鱼：停药6h,五种组织中均检测到了Cyx、Cy1、Cy4和Cy6四种化合物,残留量在22.5-42.8μg/kg范围内。肝脏和肾脏中,Cy4停药6h后即不可检出,Cyx、和Cy6在停药24h仍可检出少量,之后不可检出。Cy1在肝脏中停药3天仍可检出21.0±4.3μg/kg,但肾脏中停药3天不可检出；肌肉中停药6h后各残留物均消除至检出限以下。鱼皮Cyl和Cy6在停药24h仍可检出,喹赛多和Cy4仅在停药后6h可检出。结果证明,喹赛多在鱼残留量低、残留消除迅速,残留靶组织为肠道,残留标志物为Cyl。3喹赛多在环境中的降解规律研究在空白猪粪中添加氚标喹赛多,研究排泄物中残留药物在厩肥、土壤和小白菜中的降解与转归。200g空白猪粪中添加氚标喹赛多,使药物比活度达到22.5mCi/g,置于自然环境中用薄膜覆盖(厩肥),另一份相同样品与土壤1：1混合,并种植小白菜,每天多点采集厩肥、土壤和植物,混匀后取样检测。结果表明,喹赛多在环境中会转化成脱一氧和脱二氧产物,随着时间的延长,厩肥中喹赛多及其代谢物降解较快,且6天以后已经检测不到任何代谢产物；其中脱二氧喹赛多残留时间最长,可以存在6天,其消除半衰期为1.49天。而土壤中原形、脱一氧和脱二氧喹赛多存在时间均较短,3天之后已经检测不到任何代谢产物,因此我们推断喹赛多及其代谢物在环境中降解迅速,具有良好的环境安全性。健康肉鸡3只,按照饲料添加400mg/kg,将每只鸡每天药物摄入量换算成一次性灌胃药量,按照药物放射性比活度26.25mCi/g,收集前3天的粪便。混匀后分成两份,一份置于自然环境中用薄膜覆盖(厩肥),另一份按1：4比例与土壤充分混合,种植小白菜,隔天浇水。每天多点采集厩肥、土壤和植物,混匀后取样检测。结果表明,厩肥初期仅检测到原形、Cy2和Cy6,而且消除较快,随着时间的延长,有新的降解产物Cyl的生成,推断原因可能是首先由原形或Cy2转化生成,但其消除速度也较快,5天时已经消除完全。而Cy6在厩肥中含量最高,且残留时间最长,计算其在厩肥中的消除速率常数为0.244d,消除半衰期分别为2.84d,降解速度较快,到7天时已经降低到检测限以下。由于本身粪便中各化合物的浓度较低,因此与土壤混合后,土壤中没有检测到任何化合物的存在,植物中也没有检测到任何相关的物质。所以喹赛多经鸡体代谢产生的排泄物也不会在环境造成蓄积,不会对土壤和植物产生危害作用。综上所述,本课题首次建立了喹赛多及其主要代谢物在猪、鸡和鱼可食性组织的残留检测方法,并开展了喹赛多在猪、鸡和鱼的残留消除试验,阐明了喹赛多在三种动物体内的残留消除规律,进一步确证了喹赛多在食品动物的残留靶组织与残留标志物,提出了休药期标准,并阐明了喹赛多在环境中的降解规律。研究成果为喹赛多的食品安全性评价与提供了可靠的技术资料,为喹赛多的食品残留监控提供了科学的技术标准与方法,同时为全面评价喹赛多的食品安全性和环境安全性提供了科学依据,具有重要的学术价值与应用前景。