本研究的目的是采用水溶性的高分子材料壳聚糖、聚乙烯醇和羟丙甲纤维素作为成膜剂,与体外培育牛黄和奥硝唑制备成具有一定粘附性和柔韧性的口腔贴膜剂,增加药物在口腔局部的有效浓度,提高药物的生物利用度,保护溃疡面免受细菌感染。本研究采用壳聚糖、聚乙烯醇和羟丙甲纤维素为成膜材料,以溶剂浇铸法制备贴膜。该剂型使用方便,可减少用药次数,改善患者的顺应性,便于贮存及运输,为更好的利用体外培育牛黄药材资源提供一种新的制剂。目前,相关内容尚未见报道。主要内容1、采用单因素分析对具有粘附性的高分子成膜材料进行筛选。2、建立HPLC法测定复方牛黄口腔贴膜中胆红素和奥硝唑的含量3、采用溶剂浇铸法制备复方牛黄口腔贴膜,采用均匀设计,优化处方。4、采用国内外公认经典模型:化学灼烧法-口腔溃疡模型,考察应用复方牛黄口腔贴膜对口腔溃疡面直径、组织学特征以及生化指标,评价其疗效。5、考察复方牛黄口腔贴膜在健康志愿者唾液中的浓度。方法1、建立HPLC法测定复方牛黄口腔贴膜中胆红素和奥硝唑的含量采用Hypersil ODS2色谱柱（4.6 mm×200 mm,5μm）,以乙腈-1%醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长:胆红素450 nm,奥硝唑315 nm,柱温30℃,进样体积:10μL。2、采用单因素分析对具有粘附性的高分子成膜材料进行筛选参考国内外常用的成膜高分子材料,以成膜性、物理机械性、粘附性为评价标准,筛选成膜材料适宜的浓度范围。3、采用溶剂浇铸法制备复方牛黄口腔贴膜,并采用均匀设,优化处方参考国内外常用制备膜剂的成膜高分子材料,以膜的外观、粘附性质、机械物理性质、溶胀性、体外释药性及药物渗透性等作为评价指标进行综合评价,优选处方。4、考察复方牛黄口腔贴膜用于兔子口腔溃疡模型的疗效选用健康的2².5kg雄性新西兰兔为实验动物。采用经典的化学灼烧法建立兔子的口腔溃疡模型:用棉签蘸取浓度为50%（v/v）的冰醋酸溶液按压于兔子兔唇处,持续60s,24h后兔唇处出现白色溃疡面。于观察日分别测定兔唇溃疡面的最大直径以及溃疡面积;并预留组织作病理切片观察,考察其形态学变化;同时测定溃疡组织中SOD活性及MDA含量。5、考察复方牛黄口腔贴膜在健康志愿者唾液中的浓度选用3名健康男性受试者,实验之前用蒸馏水漱口,除去口腔里面的食物残渣,每人分别用1cm²的复方牛黄口腔贴膜按压于脸颊右侧60s,开始计时,于4h内各个时间点收集受试者唾液,用HPLC测定唾液中药物的浓度。结果1.胆红素在1.58⁵1μg·ml^-1浓度范围内,线性关系良好（r=0.9992）,其平均加样回收率分别为97.64%,98.59%,98.34%,加样回收率RSD分别为1.33%,1.10%,0.18%;奥硝唑在3.22¹03μg·ml^-1浓度范围内,线性关系良好（r=0.9990）,其平均加样回收率分别为99.27%,98.37%,99.03%;加样回收率RSD分别为1.67%,,0.22%,0.73%。胆红素和奥硝唑混合混合溶液在5 h内稳定。该法专属性强、精密度好、准确性高,具有良好的稳定性,可以用于复方牛黄口腔贴膜中胆红素和奥硝唑的含量测定。2.壳聚糖、羟丙甲纤维素和聚乙烯醇的适宜成膜浓度范围分别为1%¹.5%、0.5%²%和1%¹.5%。三者同时使用时,所制备的膜具有良好的成膜性、粘附性和柔韧性。3.优选处方为:壳聚糖1.2%、聚乙烯醇1.5%、羟丙甲纤维素1.2%、甘油2.5ml、体外培育牛黄0.2g和奥硝唑0.24g,加水到40ml。该处方膜厚426.2μm、膜重46.16mg、表面pH为6.2、2h溶胀性为44.60%、体外粘附力为436g/cm²、体外粘附时间为4.84h。4、与空白组、单牛黄组和单奥硝唑组相比,复方牛黄口腔贴膜组兔子兔唇处的口腔溃疡面积和最大口腔溃疡直径降低较为显著（p≤0.05）,复方牛黄口腔贴膜组愈合速度快于其他三组,具有显著疗效。5.在初步的研究中,健康志愿者唾液中奥硝唑的浓度以规则的方式上升,在75分钟的时候达到最高浓度（33.07μg/ml）,并于120分钟后开始下降。值得注意的是,该处方在唾液中的浓度一直维持在针对白色念珠菌最小抑菌浓度（7.8μg/ml）之上,持续约2h以上。此外,该膜表现出良好的舒适性和耐受性,未观察到刺激性。结论1.该方法专属性强、精密度好、准确性高,具有良好的稳定性,可以用于复方牛黄口腔贴膜中胆红素和奥硝唑的含量测定。2.采用壳聚糖、聚乙烯醇和羟丙甲纤维素作为成膜高分子材料所制备的口腔贴膜具有良好的柔韧性、适宜的粘附性。3.采用溶剂浇铸法能成功的制备复方牛黄口腔贴膜,且该贴膜具有良好的柔韧性、粘附性以及体外药物释放和渗透性。4.优选的复方牛黄口腔贴膜对兔子口腔溃疡模型具有良好的疗效。5.复方牛黄口腔贴膜能在口腔局部保持一定的有效浓度,表现出良好的舒适性和耐受性,无刺激性。