甘蓝醛还原酶基因克隆及其功能分析

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醛酮还原酶是NAD(P)H依赖型的氧化还原酶超家族的成员之一,可以催化许多羰基化合物的还原。本研究利用RT-PCR技术扩增了甘蓝BoAKR1, BoAKR2, BoAKR3, BoAKR4, BoAKR5和BoAKR6共6个基因的开放阅读框序列。序列分析结果表明:BoAKR1的开放阅读框序列为948bp,编码315个氨基酸,其预测分子量为35.1283KDa,理论等电点6.61; BoAKR2的开放阅读框序列为948bp,编码315个氨基酸,其预测分子量为35.2804KDa,理论等电点5.77; BoAKR3的开放阅读框序列为948bp,编码315个氨基酸,其预测分子量为35.1884KDa,理论等电点6.11; BoAKR4的开放阅读框序列为933bp,编码310个氨基酸,其预测分子量为34.6679KDa,理论等电点6.61; BoAKR5的开放阅读框序列为906bp,编码301个氨基酸,其预测分子量为33.6625KDa,理论等电点5.94; BoAKR6的开放阅读框序列为936bp,编码311个氨基酸,其预测分子量为34.5305KDa,理论等电点5.94。氨基酸序列一致性分析结果表明甘蓝BoAKRs与十字花科山萮菜属Eutrema salsugineum,盐芥属小盐芥Thellungiella halophila、荠菜属Capsella rubella,拟南芥Arabidopsis thaliana和A. lyrata subsp. Lyrata的AKRs氨基酸序列相似性达到82%~93%,这说明了AKRs在十字花科植物中是高度保守的。系统进化分析表明,BoAKR1-BoAKR6与(?)AKR4C亚家族成员聚为一支,这说明了BoAKRs属于AKR4C亚家族。利用实时荧光定量PCR技术检测了甘蓝BoAKR1-BoAKR6基因的表达水平,结果表明甘蓝在小菜蛾取食为害过程中BoAKR1基因的表达量在2h达到峰值,4h之后表达水平逐渐降低,对照组该基因的表达量较低;而其它5个基因,实验组与对照组无显著差异。这说明了小菜蛾取食诱导了甘蓝醛还原酶基因BoAKR1的表达。BoAKR1基因在小菜蛾取食胁迫下甘蓝的防御中起作用。
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