论文部分内容阅读
支气管哮喘(Bronchial asthma)是威胁儿童健康最常见的慢性疾病。由于环境、生活方式改变等因素,我国小儿哮喘发病呈逐年上升趋势,造成了巨大的家庭负担。运用中医药防治小儿哮喘历史悠长,防治效果明显,有着完善的理法方药体系。目前儿童哮喘辨证多分为发作期、迁延期与缓解期三期,风寒束肺证、痰热阻肺证等八个证型。在临床工作中,哮喘证型的判断多依据医师的个人经验,尚缺乏辨别不同证型的客观化指标。证候是中医学中特有的名词,在整个理论框架内处于核心地位。加速中医证候规范化建设,实现证候的客观化、标准化,是中医学迈向科学化、走向世界的先决条件。本研究立足于中医证候客观化、标准化,以小儿支气管哮喘为切入点,采用代谢组学技术试图揭示小儿哮喘不同证候间的物质基础,是证候表征微观化的一次有益的探索。目的:分析小儿哮喘发作期痰热阻肺证、非痰热阻肺证,缓解期肺脾气虚证尿液样本代谢谱,探寻小儿支气管哮喘中医证候学标记物。方法:纳入符合诊断标准的小儿哮喘发作期痰热阻肺证24例、非痰热阻肺证20例,缓解期肺脾气虚证40例,同时纳入健康小儿29例设为正常组。采集各组小儿尿液标本进行气相色谱与质谱联用技术(Gas Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer,GC-MS/MS)检测,同时将痰热阻肺证、非痰热阻肺证组尿液标本进行液相色谱与质谱联用技术(Liquid Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer,LC-MS/MS)检测,将所得数据进行正交偏最小二乘法(Orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)判别分析,变量重要性投影值(Variable importance in the projection,VIP)、非参数检验以及XCMS Online分析平台筛选、确定组间差异性代谢物,同时利用MetaboAnalyst平台分析确定异常代谢通路。结果:各组间均能够良好区分,一系列差异性代谢物及代谢通路被确定。1.与正常组相比,哮喘发作期患儿尿中肌醇、尿酸、硬脂酸等14种物质的含量下降,氨基丙二酸含量升高;主要涉及丙酮酸代谢,赖氨酸降解、生物合成等5条代谢通路;2.与发作期非痰热阻肺证组相比,GC-MS/MS结果显示:痰热阻肺证患儿尿中草酸、L-苏氨酸、嘧啶等9种物质的含量下降,主要涉及戊糖磷酸途径,肌醇磷酸代谢4条等代谢通路。LC-MS/MS结果显示:痰热阻肺证患儿尿中蛋氨酸、琥珀酸、赖氨酸、肌酸、犬尿氨酸、环腺苷酸等多种有机酸、氨基酸,以及多种脂类、酮类化合物含量下降,仅羟基吲哚乙醛含量升高,主要涉及生物素代谢、色氨酸代谢等5条代谢通路。3.与肺脾气虚证组相比,痰热阻肺证患儿尿中氨基丙二酸、脯氨酸、苯丙氨酸、棕榈酸等8种物质含量升高,肌醇、尿酸、硬脂酸含量降低,主要涉及精氨酸和脯氨酸,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸等4条代谢通路。结论:小儿哮喘发作期与健康小儿尿液代谢物具有差异;支气管哮喘发作期不同证型、哮喘不同时期不同证型间存在代谢标记物与代谢通路基础,可能是区分中医不同证候的本质,通过进一步验证优化或可作为小儿哮喘中医证候判断生物学标记物。