高灵敏近同时分析多种“瘦肉精”残留的电化学发光免疫传感器阵列

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现今,克伦特罗(CLB),莱克多巴胺(RAC),沙丁胺醇(SAL)等β2-受体激动剂,由于其可以促进动物生长,抑制脂肪合成,常作为“瘦肉精”被非法滥用。其容易残留,且具有一定毒性,已在一些国家引起了严重的食品安全事故。鉴于它们对于人类健康潜在的危害,欧盟、中国、日本等世界上大多数国家都禁止将β:受体激动剂作为动物生长促进剂使用,并对其进行严格监控。多种色谱方法已被应用于同时检测多种“瘦肉精”残留,比如液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术,气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)等。但是这些方法往往需要耗时的样品预处理过程,并需要依靠昂贵而精密的仪器,所以一般只是作为确证与精确定量的方法。近年来,一些基于酶联免疫吸附分析(ELISA)、电化学、荧光、化学发光分析的免疫分析方法已在单组份β2-受体激动剂分析中,显示了良好的应用前景。这些免疫分析方法的样品预处理过程比较简单,分析通量高,尤其适合应用于快速筛查。遗憾的是,目前仅能找到极少的可同时检测多种β:-受体激动剂的多组分免疫分析(MIA)的文献报道。因而发展一种高灵敏的多组分免疫分析方法用以检测多种“瘦肉精”残留,将具有重大的实用价值。近来,电化学发光(ECL)分析吸引了广泛关注,由于具有优良的空间与时间的可控性,其被认为尤其适合构建免疫传感器。并且由于它的高灵敏度的优点,ECL分析被认为适合检测低浓度水平的β2受体激动剂残留。本文首先成功构建了单组分的ECL免疫传感器,实现了对CLB的高灵敏检测。而后,我们将以上研究成果用于以丝网印刷电极作为基底的ECL免疫传感器阵列的组装,实现了对RAC与SAL这两种“瘦肉精”高灵敏近同时分析。主要工作如下:(1)电化学发光免疫传感器高灵敏检测猪尿中痕量的克伦特罗残留。一种高灵敏的ECL免疫传感器第一次应用于检测猪尿中痕量的CLB残留。在该实验体系中,选用具有成膜性良好,并且生物相容性与导电性俱佳的壳聚糖-纳米金复合物固定抗原;合成了Ru(bpy)32+标记CLB抗体,将其作为ECL探针。采用竞争免疫分析模式,实现对CLB的高灵敏检测,得到CLB的线性检测范围为0.010-1.0ng/mL,检测限(LOD)为0.0050ng/mL。将该ECL免疫传感器应用于猪尿中CLB的分析,结果令人满意。由于该方法操作简单,分析时间较短,检测灵敏度较高,非常适合痕量CLB残留的筛查。(2)电化学发光免疫传感器阵列高灵敏近同时分析猪尿中多种“瘦肉精”残留。结合以上的实验结果,以自制的丝网印刷碳电极作为基底,设计了一种ECL免疫传感器阵列。将RAC与SAL的抗原分别固定于该阵列的不同工作电极表面。竞争免疫反应后,借助自制的单刀四掷开关,以光电倍增管依次采集该阵列上的ECL信号。从而实现了对RAC与SAL的近同时分析,其线性检测范围分别为0.025-3.0与0.050-10ng/mL,LOD分别为8.5与17pg/mL。该ECL免疫传感器阵列成功避免了相邻反应区域间由光信号扩散与电活性产物扩散所致的交叉干扰。与常规的色谱方法与ELISA相比,由于该方法低成本、方便使用、高通量的优点,其更加适合筛查大批量样品中的多种“瘦肉精”的痕量残留,其在食品安全与激动剂监控领域展现了广阔的应用前景。
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