北极太平洋扇区表层沉积物中微生物群落的分子生物学分析

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对2003年从北极太平洋扇区采集的九个表层沉积物样品,采用PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术进行细菌16S rDNA V3区序列的系统发育分析。并分别建立其中两个沉积物样品P13和S26的细菌和古菌16S rDNA克隆文库,对细菌、古菌系统发育组成及其多样性进行研究。 PCR-DGGE的结果表明,九个沉积物样品获得的16S rDNA序列分别归属于七个细菌类群:α、β、γ和δ-变形菌群(α、β、γ、δ-roteobacteria);噬纤维菌一屈挠杆菌-拟杆菌群 (Cytophaga—Flexibacter—Bacteroides,CFB);放线菌门(Acitinobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteria),变形菌门(Proteobacteria)特别是γ-Proteobacteria在沉积物样品中占优势。九个沉积物样品中获得的16S rDNA序列条带数目和细菌类群有所不同,浅海五个沉积物样品S11、C19、P11、R15和P13,深海二个沉积物样品S26和B78经DGGE分离,获得的可分辨电泳条带的数目比较多,而深海二个沉积物样品P27和S16经DGGE分离,获得的可分辨电泳条带的数目比较少。 对浅海沉积物样品P13建立细菌16S rDNA克隆文库,获得84个克隆主要归属于八个细菌类群:α、β、γ和δ-变形菌群(α、β、γ、δ-Proteobacteria);放线菌门(Acitinobacteria);酸杆菌门(Acdiobacria);拟杆菌属(Bacteroides);疣微菌-门(Verrucomicrobia)。47个克隆属于γ-Proteobacteria,各有8个克隆属于δ-roteobacteria和Acdiobacteria,6个克隆属于α-Proteobacteria,2个克隆属于Actinobacteria;各有1个克隆属于β-Proteobacteria、Verrucomicrobia和Bacteroides。深海沉积物样品S26建立细菌16S rDNA克隆文库获得100个克隆主要归属于八个类群:α、β、γ和δ-变形菌群(α、β、γ、δ-Proteobacteria);噬纤维菌-屈挠杆菌-拟杆菌群(Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides,CFB);放线菌门(Actinobacteria);酸杆菌门(Acidobacteria);厚壁菌门(Firmutes)。55个克隆归属于γ-Proteobacteria,19个克隆属于α-Proteobacteria,15个克隆属于CFB类群,各有2个克隆属于δ-Proteobacteria和Actinobacteria,另外各有1个克隆序列属于β-Proteobacteria、Acidobacteria和Firmutes。限定当16S rDNA序列相似性达到98%或以上时为一个OTU(operational taxonomic units),沉积物P13中84个克隆包含69个OTUs,而沉积物S26中100个克隆包含50个OTUs,其中有3个OTUs是两个沉积物所共有的。根据Estimate S得出的多样性曲线表明,沉积物P13的细菌多样性比沉积物S26要丰富,前者大约是后者的2倍左右。 在沉积物样品P13中,通过PCR-DGGE和16S rDNA克隆文库方法得出的细菌类群略有不同,在沉积物S26中两种方法得出的细菌类群基本相同。无论哪种方法,γ-Proteobacteria在沉积物样品中所占的比列均超过50%,是第一大优势类群,充分说明了在北极太平洋扇区表层沉积物样品中γ-Proteobacteria的丰度。 通过构建北极太平洋扇区表层沉积物样品P13和S26古菌16S rDNA克隆文库表明,北极太平洋扇区表层沉积物中几乎全部的古菌16S rDNA序列克隆属泉生古菌门(Crenarchaeota)。泉生古菌门中的工类海洋古菌类群,在两个古菌文库中均为第一大优势类群占72%左右,另外在两个古菌文库中均发现泉生古菌门中的Cenarchaeacea,在P13古菌文库中占25%左右,在S26古菌文库中占28%左右,说明在北极太平洋扇区表层沉积物样品中Cenarchaeacea也较丰富,并且在两个古菌文库中发现新的分类群PAPl3和PAS26。限定当16S rDNA序列相似性达到98%或以上时为一个OTU(operational taxonomic units),两个古菌文库共得到25个OTUs,P13中有15个OTUs,S26中有16个OTUs,其中有6个OTUs是两个古菌文库所共有的。根据Estimate S得出的多样性曲线,本研究预测沉积物P13的OTUs丰度为27.25,沉积物S26的OTUs丰度为40.5,因此沉积物S26古菌多样性比P13要丰富。
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