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目的:研究Nur77与GRP78在糖尿病心肌缺血再灌注损伤敏感性增加中的作用,以及上述过程发生的潜在分子通路。方法:分别将正常、高糖培养基中培养的H9C2心肌细胞置于无氧条件下进行培养2h建立心肌缺血再灌注(I/R)模型,得到正常培养+缺氧诱导组(NC+I组,n=9)和高糖培养+缺氧诱导组(H/H+I组,n=9);正常细胞作为空白对照组(NC组,n=9)。用Annexin-V FITC/PI双染法、分光光度法测Caspase3活性及JC-1染色法测线粒体膜电位,评估各组凋亡差异;用荧光染色法、Western blot法检测胞内Nur77、GRP78的分布与相对表达量,并用Co-IP法测定Nur77与GRP78在胞内的结合情况。结果:检测各组心肌细胞的凋亡差异:与NC组相比,其他两组(NC、H/H+I)细胞凋亡明显增加(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组细胞凋亡明显增加(P<0.01)。检测各组细胞Nur77、GRP78亚细胞分布比较:与NC组相比,NC+I组及H/H+I组细胞核周围Nur77分布明显增加(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组细胞核周围Nur77分布明显增加(P<0.05)。与NC组相比,NC+I组及H/H+I组细胞线粒体周围Nur77分布明显增加(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组细胞粒体周围Nur77分布明显增加(P<0.01)。与NC组相比,其他两组细胞线粒体周围GRP78分布明显增加(P<0.05);与NC+I组相比,H/H+I组细胞GRP78线粒体周围分布稍有增加(P>0.05)。与NC组相比,其他两组细胞内质网GRP78分布明显增加(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组细胞内质网GRP78分布明显增加(P<0.01)。检测各组细胞Nur77、GRP78相对表达水平可得:与NC组相比,其他两组(NC、H/H+I)细胞Nur77表达明显升高(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组细胞Nur77表达明显升高(P<0.05)。与NC组相比,其他两组细胞GRP78表达明显升高(P<0.05);与NC+I组相比,H/H+I组细胞GRP78表达明显升高(P<0.01)。检测各组细胞IP反应后裂解液中Nur77与GRP78的含量:与NC组相比,NC+I组及H/H+I组IP反应后Nur77含量无明显增加(P>0.05);与NC+I组相比,H/H+I组IP反应后Nur77含量无明显增加(P>0.05);与NC组相比,NC+I组及H/H+I组IP反应后GRP78含量明显增加(P<0.01);与NC+I组相比,H/H+I组IP反应后GRP78含量明显增加(P<0.01)。结论:正常心肌细胞I/R以及高糖培养下的心肌细胞I/R敏感性增加均与细胞凋亡密切相关;上述过程中心肌细胞凋亡的产生,可能与细胞内Nur77、GRP78的表达量增加和细胞内位移密切相关;Nur77可与GRP78相互结合,结合前述相关结论,推测当上述过程中凋亡信号触发后,Nur77、GRP78两种蛋白可同时位移至线粒体并相互作用,并最终导致细胞凋亡,心肌细胞I/R以及高糖培养下的心肌细胞I/R敏感性增加可能与Nur77-GRP78凋亡通路相关。