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目的 1.观察凉血祛湿止痒汤治疗急性湿疹的临床疗效。2.采用小鼠湿疹模型皮损,分别从皮损肿胀度及厚度差,IL-2、IL-4及LTB4水平,AQP3mRNA的基因及蛋白表达方面探究凉血祛湿止痒汤的可能作用机制。方法 本课题研究采用两部分进行:1.凉血祛湿止痒汤的临床疗效观察。严格遵照制定急性湿疹(湿热内蕴证)诊断标准,设计随机、开放、平行对照实验,以氯雷他定片为对照药物,观察红斑、丘疹、水疱、渗出、靶皮损面积及瘙痒程度,评估临床总体疗效,并观察复发率及药物不良反应。2.探究凉血祛湿止痒汤的作用机理。(1)观察小鼠湿疹模型皮损的形态学变化。采用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液诱导建立湿疹模型,进行凉血祛湿止痒汤药物干预,并设立阳性对照氯雷他定组及阴性对照模型组(生理盐水)、空白组,根据赵辨的EASI评分方法对皮损进行评分,参照《中药新药临床研究指导原则》(试行)进行疗效评定,观察红斑、水肿、渗出、表皮剥脱等皮损变化。(2)将药物干预后的小鼠进行皮损取材,测定凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、模型组皮损厚度差及肿胀度。(3)采用ELISA方法,检测凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、模型组和空白组小鼠湿疹模型皮损的IL-2、IL-4及LTB4的含量。(4)采用RT-PCR方法,检测凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、模型组和空白组小鼠湿疹模型皮损AQP3mRNA的含量。(5)采用Western Blot方法,检测凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、模型组和空白组AQP3的蛋白表达。结果 1.临床疗效:凉血祛湿止痒汤治疗急性湿疹(湿热内蕴证),在渗出、水疱方面明显优于氯雷他定组,差异具有统计学意义(P<0.05),在红斑、丘疹方面与氯雷他定组疗效相当(P>0.05);在靶皮损面积方面与氯雷他定组相比,有明显的统计学差异(P<0.05);在瘙痒程度方面,明显优于氯雷他定组(P<0.05)。对于两组总体疗效评价中,凉血祛湿止痒汤组总有效率为86.49%,氯雷他定组总有效率为80.56%,经统计分析,P<0.05,凉血祛湿止痒汤组总体疗效优于氯雷他定组。2.基础实验研究(1)形态学观察:凉血祛湿止痒汤干预药物诱导小鼠湿疹模型,与氯雷他定组、模型组对照,在红斑、丘疹、渗出、表皮剥脱方面,具有明显统计学差异(P<0.01),进行组间比较,凉血祛湿止痒汤组与氯雷他定组明显优于模型组,差异极其显著(P<0.01),并且凉血祛湿止痒汤组各指标疗效明显优于氯雷他定组(P<0.05)。在总体疗效评价方面,凉血祛湿止痒汤组的总有效率为88.89%,氯雷他定组为77.78%,模型组为27.78%,凉血祛湿止痒汤总体疗效优于氯雷他定组及模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)厚度差、肿胀度方面:本实验在小鼠模型皮损厚度差、肿胀度方面,四组小鼠具有明显统计学差异(P<0.01)。与空白组比较,三组的皮损厚度与皮损重量具有显著差异(P<0.01),与模型组比较,凉血祛湿止痒组与氯雷他定组具有显著差异(P<0.05),并且凉血祛湿止痒汤在厚度差、肿胀度两方面明显优于氯雷他定组(P<0.05),差异具有统计学意义。(3)IL-2、IL-4和LTB4 水平:凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、模型组及空白组在IL-2、IL-4和LTB4水平方面具有显著差异(P<0.01)。凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组的IL-2水平,明显高于模型组(P<0.05),低于空白组(P<0.05),凉血祛湿止痒汤组较氯雷他定组明显升高(P<0.05)。在IL-4、LTB4水平,凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组低于模型组(P<0.01),高于空白组(P<0.01),凉血祛湿止痒汤组优于氯雷他定组(P<0.05),差异具有统计学意义。(4)AQP3mRNA基因水平:四组在AQP3mRNA的2-△△CT值具有显著差异,(P<0.01),凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组、空白组与模型组比较显著降低,(P<0.01)。进行组间比较,凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组较空白组显著升高(P<0.01),较模型组显著降低(P<0.01)。与氯雷他定组比较,凉血祛湿止痒汤组显著降低(P<0.05),差异具有统计学意义。(5)AQP3蛋白表达水平:四组条带清晰可辨,灰度差可见,模型组最强,依次是氯雷他定组、凉血祛湿止痒汤组、空白组,其中空白组灰度最低。对AQP3/β-actin值进行统计分析,与空白组对照,三组具有显著差异(P<0.01);凉血祛湿止痒汤组、氯雷他定组明显低于模型组(P<0.01);而凉血祛湿止痒汤组优于氯雷他定组(P<0.05),差异具有统计学意义。结论 凉血祛湿止痒汤临床疗效显著,具有明显的消除红斑、水疱、丘疹及减少渗出的作用,基础实验表明本药可以减轻小鼠皮损肿胀程度,减轻皮损红斑、渗出、表皮剥脱等炎症反应,有效的调节皮损中IL-2上升,下调IL-4的含量,抑制皮损中LTB4释放,有效抑制模型皮损中AQP3的代偿性增殖。考虑凉血祛湿止痒汤具有明显的抗炎作用及修复屏障功能的作用。由此可见,凉血祛湿止痒汤可以调节Th1/Th2的平衡,抗变态反应,抑制LTBs释放,减轻炎性症状。初步表明凉血祛湿止痒汤具有抗炎作用机制。本实验发现凉血祛湿止痒汤可以明显抑制AQP3的在急性湿疹中的高表达,从而达到修复屏障功能,减少渗出的作用,初步表明凉血祛湿止痒汤的作用靶点可能为修复皮肤屏障功能。