论文部分内容阅读
目的观察氟伐他汀(Fluvastatin,Flu)对早期糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)大鼠模型肾脏p27蛋白表达的影响,探讨其对早期DN的作用和作用机制。方法本实验分两部分:第一部分(动物实验):实验大鼠随机分为4组:1.正常对照组(C组);2.正常对照+Flu组(CF组);3.糖尿病肾病模型对照组(DN组);4.模型+氟伐他汀组(DNF组)。DN组和DNF组采取一次性腹腔注射链脲霉素(Streptozoticin,STZ)方法制成糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大鼠模型,模型成功后即给予CF组、DNF组氟伐他汀(2 mg/kg)灌胃,C组、DN组以等量蒸馏水灌胃。观察各组大鼠的1、2、4、8周时血糖及体重变化。成模后8周时留取24小时尿量,并测量24小时蛋白定量,然后处死大鼠,测量左肾重,留取血、尿及肾脏标本,检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血糖(BG)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、尿肌酐(Ucr)和24小时尿蛋白(UP),并计算肌酐清除率(Ccr)和肾脏肥大指数(KHI);观察肾脏组织病理学变化;免疫组织化学技术检测肾脏组织中细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27、转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)三种蛋白的表达水平;蛋白质印迹杂交(Western blot)方法检测p27蛋白表达水平。第二部分(细胞实验)进行肾小球系膜细胞培养,细胞分为2组:1.正常对照组:(NG,5.6mmol/L D-葡萄糖);2.高糖组:(HG,30 mmol/L,D-葡萄糖),在24,48,72,120 h时取样,应用Western blot方法检测p27蛋白的变化。结果第一部分(动物实验),DN组和DNF组大鼠血糖较C组、CF组明显升高且维持在一个较高水平(P<0.01)。C组、CF组体重增长迅速,DN组和DNF组大鼠体重增长缓慢(P<0.01)。DN组、DNF组的血胆固醇、甘油三酯高于C组和CF组(P<0.01),但DN组、DNF组两组间差异无统计学意义(P>0.05)。DN组和DNF组大鼠24小时尿蛋白、肾脏肥大指数均明显高于C组和CF组(P<0.01),DNF组低于DN组(P<0.05)。DN组的Ccr高于C组和CF组(P<0.01),DNF组的Ccr高于C组和CF组(P<0.05),但DNF组较DN组Ccr有所降低(P<0.05)。DN组和DNF组的Scr较C组和CF组升高的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。肾脏病理改变显示DN组和DNF组均出现早期DN改变,DNF组较DN组为轻。免疫组织化学技术半定量分析显示,DN组、DNF组大鼠肾脏固有细胞中的p27、TGF-β1和FN蛋白表达均高于C组和CF组(P<0.0l),但DNF组中p27、TGF-β1和FN蛋白表达较DN组降低(P<0.05)。Western blot免疫印迹条带显示,与C组和CF组大鼠相比,DN、DNF组肾脏组织内p27水平明显增高(P<0.01),应用氟伐他汀能抑制DN早期p27水平的升高,DNF组p27相对表达量低于DN组( P<0.05)。第二部分(细胞实验):Western blot免疫印迹条带显示,高糖对肾小球系膜细胞中p27蛋白表达的影响是,在高糖作用24 h后,p27蛋白表达明显增加并维持120 h。结论1、肾小球系膜细胞在高糖培养下,p27蛋白表达明显增加。2、氟伐他汀对血糖影响不大,但能降低早期糖尿病肾病尿蛋白排泄量及肾脏肥大指数,有一定肾脏保护作用。3、氟伐他汀具有非依赖降脂的肾脏保护作用,作用机制之一是通过调节细胞周期负性调控蛋白p27表达,抑制肾脏细胞异常的增殖与肥大,减少细胞外基质合成而实现。4、早期通过干预肾脏细胞的细胞周期调控机制影响细胞的生长状态,可以延缓早期糖尿病肾病的进展。