目的1．研究本地区原发性皮肤黑素瘤（Cutaneous malignant melanoma，CMM）初诊时预后评估状况，性别因素与临床分期的关系。2．研究孕激素受体（Progesterone receptor,PR）在CMM中的表达情况，以及PR表达对CMM细胞增殖、抗凋亡以及免疫表型的影响。3．研究孕激素对黑素瘤细胞系体外生长、抗炎因子表达的影响及信号传导通路。方法1．收集近20年本地区所诊断、未经处理并具有完整临床、病理资料的原发性CMM43例，回顾性分析其临床、组织病理特征，进行预后评估分析。2．以免疫组化法检测35例原发性CMM病人40份标本PR及增殖性细胞核抗原（Proliferative cell nuclear antigen，PCNA）、抗凋亡蛋白BcI-2（B-cellCLL／lymphoma 2）、免疫抑制分子人类白细胞抗原G（Human leukocyte antigen-G，HLA-G）的表达，分析PR表达与PCNA、Bcl-2、HLA-G表达及CMM临床组织学预后变量的相关性。3．体外培养黑素瘤细胞系A375及A875，间接免疫荧光法检测黑素瘤细胞系A375及A875 PR蛋白表达。4．以不同浓度孕激素、PR拮抗剂RU486、MEK1／2抑制剂U0126抑制以及PI3-K/Akt抑制剂LY294002对体外培养黑素瘤细胞系A375及A875进行干预。5．MTT法检测孕激素对黑素瘤细胞体外生长的影响；流式细胞术检测孕激素对黑素细胞凋亡的影响。6．RT-PCR、ELISA或Western blot法分别检测干预处理后黑素瘤细胞IL-10、TGF-β1及HLA-G mRNA及蛋白表达。7．Western blot检测MAPK信号途径ERK1／2磷酸化及PI3-K／Akt信号途径Akt磷酸化水平。结果1．湖北地区43例原发性CMM初诊时预后评估的回顾性分析1)湖北地区43例原发性CMM初诊时临床分期Ⅰ-Ⅱ期27例（27／43，62．8％），Ⅲ-Ⅳ期16例（16／43，37．2％）；男女性别比2．91：1；平均年龄57．9±1．92岁；平均发病-诊断间期为1．74±0．2年；平均Breslow厚度为1．66±0．19 mm；溃疡12例（27．9％）；水平放射性生长9例（20．9％），垂直性生长34例（79．1％）；无炎细胞浸润18．6％，低中度炎细胞浸润58％，显著炎细胞浸润23．3％。2)临床分期与其他预后变量的关系：临床Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期临床组织学特征比较，性别比无明显差异（x²=0．430,P=0．512）；高分期多见于Breslow厚度大于1．00mm肿瘤（x²=14．149,P=0．001）及垂直生长性肿瘤（x²=6．475,P=0．009）。3)比较近2个10年间本地区原发性CMM的主要预后变量，发病-诊断间期缩短（2．24年与1．48年，P=0．017），其它预后变量无显著变化。2．CMM中PR的表达情况及意义1)在CMM中PR的阳性表达率为25．7％，在痣细胞痣中无表达；PR在CMM与痣细胞痣中表达的差异有统计学意义（Fisher确切概率法，P＜0．01）。2)与临床组织学预后变量的关系：女性（P=0．416）、年龄≤55岁（P=0．416）、病程＞1年（P=0．129）、溃疡（P=0．416）以及非肢端型组织亚型（P=0．416）PR阳性比例增高，但均无统计学意义。3)与肿瘤生长的关系：PR与PCNA表达呈显著负相关（r=-0．353，P=0．026），PR与Bcl-2表达的无相关性。4)与免疫负调节分子HLA-G表达的关系：HLA-G与PR在黑素瘤中均有表达，但两者无显著相关性（r=0．012,P=0．946）。HLA-G表达与炎性细胞浸润有关（Fisher’sexact test，P=0．032），与Bcl-2显著正相关（r=0．440，P=0．008）。3．孕激素对黑素瘤细胞细胞系A375及A875体外生长的影响1)黑素瘤细胞系A375及A875均无细胞核内PR蛋白表达。2)孕激素对两株细胞生长均有影响，低浓度时表现为促生长效应，随浓度增高促增殖效应减弱并出现抑制效应。3)孕激素的促生长效应可被MEK1／2抑制剂U0126抑制，但不能被PR拮抗剂RU486拮抗。4)孕激素浓度≥1×10^-7M时呈剂量依赖方式促进细胞凋亡。5)低浓度孕激素(1×10^-9M)上调ERK1／2磷酸化水平，高浓度(1×10^-6M)下调ERK1／2磷酸化水平。4．孕激素对黑素瘤细胞抗炎分子表达的影响1)黑素瘤细胞系A375及A875均在mRNA及蛋白水平表达IL-10及TGF-β1。2)孕激素浓度≥1×10^-7M对两株细胞IL-10表达均有显著上调作用；孕激素对TGF-β1表达无明显影响；孕激素不能诱导HLA-G表达。3)Akt抑制剂LN294002可消除孕激素对IL-10表达上调效应，但RU486无拮抗效应。4)孕激素浓度为1×10^-7M时上调A375细胞Akt磷酸化水平。结论1．本地区原发性CMM男性发病高于女性，初诊时临床分期偏高，与临床高分期有关的预后变量为肿瘤Breslow厚度及垂直生长模式。2．本组部分病例表达PR，并与恶性转化、肿瘤生长相关。3．低浓度孕激素刺激黑素瘤细胞细胞系A375及A875体外生长，而高浓度孕激素抑制黑素瘤细胞体外生长；孕激素对黑素瘤生长调节效应不依赖经典核PR；孕激素对黑素瘤生长调节效应与MPAK信号通路活化有关。4．黑素瘤细胞细胞系A375及A875均在mRNA及蛋白水平表达IL-10及TGF-β1；孕激素可呈剂量依赖方式上调IL-10表达，并与PI3-K/Akt信号通路活化有关；孕激素对黑素瘤细胞IL-10的调节效应不依赖经典核PR。