白藜芦醇是一种植物多酚,因为其副作用小、易获得、价格低廉和良好的抗癌特性受到广泛关注。诱导癌细胞衰老是一种新兴的抗癌机制,目前已有研究证明白藜芦醇通过诱导癌细胞衰老发挥抗癌功效,但其机制尚不明确。内质网应激不仅与癌症进展密切相关,还参与细胞衰老调控。因此我们猜想:白藜芦醇通过激活内质网应激诱导癌细胞衰老。在本论文中,我们使用癌细胞系MCF-7、NCI-H1299探讨白藜芦醇的抑癌机理。首先,衰老相关β半乳糖苷酶染色实验结果显示20μM白藜芦醇处理癌细胞7天和100μM白藜芦醇处理癌细胞1天均可诱导癌细胞衰老,这与我们实验室之前的研究结果一致。克隆形成实验结果显示10和20μM白藜芦醇均可抑制癌细胞克隆形成,进一步说明了白藜芦醇的抑癌效果。接下来我们开始探讨白藜芦醇诱导癌细胞衰老的机制。将癌细胞暴露于100μM白藜芦醇24 h后进行实时荧光定量PCR和western blot实验,结果显示白藜芦醇上调了内质网应激相关基因Perk、IRE-1α、ATF-6α和GRP78的mRNA表达水平以及GRP78的蛋白表达水平。钙离子探针装载实验结果显示白藜芦醇升高了癌细胞内钙离子浓度。此外,内质网应激抑制剂4-PBA处理癌细胞后改善了白藜芦醇诱导的癌细胞衰老。白藜芦醇是SIRT1的激活剂,有文献显示SIRT1缺失可降低肝癌细胞中p38MAPK活性形式pp38MAPK的表达,而p38MAPK参与癌细胞内质网应激的调控。为了探讨SIRT1/p38MAPK通路是否参与白藜芦醇诱导的内质网应激调控,我们引入SIRT1抑制剂EX527和p38MAPK抑制剂SB203580,western blot结果显示100μM白藜芦醇促进了SIRT1、p-p38MAPK和p38MAPK的表达,而抑制SIRT1逆转了白藜芦醇促进的p-p38MAPK和GRP78表达,抑制p38MAPK部分恢复了白藜芦醇促进的GRP78的表达。肿瘤抑制基因DLC1在癌细胞中经常下调或缺失,是潜在的抗癌靶点。我们实验室之前的研究证明白藜芦醇通过促进ROS产生上调DLC1表达,从而诱导癌细胞衰老。已有研究表明参与氧化应激的另一个高活性分子NO可以正向调控DLC1下游分子Rho A,白藜芦醇可以调控细胞质NO的浓度,此外,抑制Rho A/C信号通路可促进非折叠蛋白反应相关蛋白的mRNA水平表达,因此我们推测NO参与DLC1调控,从而激活内质网应激。我们的NO荧光探针装载和western blot实验结果显示100μM白藜芦醇减少了癌细胞内NO浓度并下调了i NOS蛋白表达,加入NO供体硝普钠（SNP）后显著逆转了白藜芦醇促进的DLC1表达。敲低DLC1后GRP78表达水平也随之下调,而过表达DLC1促进了GRP78的表达。DNA损伤是衰老的重要指标,为了探究内质网应激是否通过引起DNA损伤诱导癌细胞衰老,我们进行了western blot实验,结果显示:100μM白藜芦醇上调了DNA损伤相关蛋白p-CHK1的表达,而内质网应激抑制剂4-PBA干预后逆转了白藜芦醇对p-CHK1的上调。线粒体功能紊乱也是诱导细胞衰老的重要因素,通过线粒体膜电位检测实验发现,白藜芦醇降低了癌细胞线粒体膜电位,而抑制内质网应激改善了白藜芦醇诱导的膜电位下降。此外,western blot结果显示100μM白藜芦醇下调了线粒体生物合成相关分子PGC-1α的表达,而4-PBA缓解了白藜芦醇对PGC-1α的影响。以上结果表明:在癌细胞MCF-7和NCI-H1299中,白藜芦醇通过激活SIRT1促进p38MAPK表达,并通过下调i NOS表达降低胞质NO浓度,从而促进DLC1表达。p38MAPK和DLC1分子均可激活内质网应激,引起DNA损伤和线粒体功能紊乱,最终诱导癌细胞衰老。本文首次在癌细胞中证明了SIRT1对p38MAPK的调控作用,并提出白藜芦醇通过NO/DLC1信号通路调控内质网应激,为天然产物白藜芦醇的抑癌机制提供了新的信号通路及实验依据。