2004年入秋以来,浙江省三门县发生了严重的青蟹疾病,死亡率高,造成了极大的经济损失。据不完全估计,2004年三门县由此造成的经济损失达1.5亿元左右。至今尚无有效的控制方法。本文主要针对三门县近年来发生的锯缘青蟹流行疾病开展研究,分离并确定病原,为病害的预防和控制技术研究提供实验依据和理论基础。本文以浙江省台州市三门县患病养殖锯缘青蟹为研究对象,通过改良Frey培养基对青蟹支原体病原进行分离,利用理化试验和分子生物学研究对分离株进行鉴定,通过分离菌回接健康青蟹确定其致病力,同时利用电镜观察菌株超微结构,得出如下结果：1.本文成功从濒死患病的锯缘青蟹腮、肠组织中分离得到一株支原体,命名为My-1d。在固体培养基上其菌落形态呈典型的“煎蛋状”。理化试验初步确定菌株为支原体科。通过已报道支原体16S rRNA基因序列设计PCR引物并进行扩增、克隆。基因测序分析后证明分离株属于莱氏无胆甾原体(Acholeplasma laidlawii),模式株为PG-8A(登录号：CP000896.1),同缘性达到99%以上。2.菌株My-1d负染后,在电镜下观察发现支原体具高度多形态特征,以链珠状、分枝状、球状、双球状等为主,菌体整体形态呈两头大,中间小。菌株内部切片超微结构观察到支原体无细胞壁,外部为一层原生质膜,胞质染色后类似细颗粒物,内部可见染色较深的核糖体。3.病原回归感染实验证明该支原体能够使健康锯缘青蟹引起疾病和死亡。人工感染患病青蟹症状与自然青蟹发病现象相似,通过电镜观察,可在组织电镜切片中观察到与菌株My-1d相似形态的支原体存在。其中以注射方式感染效果最为显著。