绞股蓝多糖的分离纯化、结构分析及生物活性研究

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绞股蓝Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino是一种药食同源的多年生草质藤本植物,具有清热解毒、祛痰止咳等功能,市售以绞股蓝茶为主。目前研究热点主要集中于皂苷类成分的研究。随着多糖研究的逐渐兴起,绞股蓝多糖的药理作用也受到越来越多人的重视。绞股蓝中除皂苷外,多糖是一类重要的具有生物活性的大分子物质,因其水溶性更好,生物利用度更高,具有更好的应用前景。本实验采用低浓度碱对水提后的绞股蓝进行提取,分离纯化得到一种全新的绞股蓝多糖,并对其进行化学结构分析及抗氧化抗炎活性研究。实验结果如下:1.绞股蓝多糖的提取工艺:绞股蓝经甲醇回流脱脂、热水萃取后再采用料液比为1:16的0.5mol/L氢氧化钠溶液在80℃提取2小时。得到的碱液经盐酸中和后透析,透析液采用双氧水除色素,乙醇沉淀后氮气吹干获得绞股蓝粗多糖。2.绞股蓝粗多糖的分离纯化:绞股蓝粗多糖经DEAE阴离子交换树脂与Sephacryl S-400葡聚糖凝胶树脂分离后,冷冻干燥得到精制多糖GPP-S。采用HPLC法测定得到GPP-S纯度为99.9%,分子量为1.2×106Da。3. GPP-S的结构解析:气相色谱法测定GPP-S单糖组成为鼠李糖:阿拉伯糖:葡萄糖:半乳糖=1:3.72:19.49:7.82,其中葡萄糖含量最高。PMP柱前衍生化法也证明其含有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖四种单糖,并且不含有葡萄糖醛酸。甲基化气质联用结果显示GPP-S的糖苷键组成为1,4-Glc:1,4,6-Glc:1,6-Gal:1-Ara=17.1:2.78:1.51:1.00。综合NMR结果推断GPP-S是以1,4-Glc和1,6-Gal为主链,每6个1,4-Glc单元有1个1,4,6-Glc分支,且以1-Ara为末端。GPP-S的化学结构如下图所示。4. GPP-S的生物活性测定:绞股蓝具有体外抗氧化及抗炎能力。体外抗氧化实验表明,绞股蓝多糖GPP-S对DPPH (DPPH自由基)、O2-(超氧阴离子自由基)和HO(羟基自由基)均具有一定的清除作用,其中对O2-清除率最高。大鼠巨噬细胞抗炎模型实验结果表明,GPP-S可以抑制三种炎症因子IL-1β, IL-6和COX-2的基因表达,并对COX-2的基因表达抑制率最强。上述结果提示GPP-S具有延缓因氧化引起的机体衰老和缓解慢性炎症的潜在功效,可以开发为一种药食同源来源的功能食品添加原料。
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