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第一部分卵巢上皮性癌中DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2启动子区甲基化状态研究【目的】研究卵巢上皮性癌(ovarian epithelial carcinoma,OEC)中DNA错配修复基因(mismatch repair genes,MMR)hMLHl、hMSH2启动子区甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用,探讨DNA MMR基因甲基化与卵巢癌诊疗、预后的关系,评价其作为OEC早期诊断和判断预后的生物学标志的可能性。【方法】采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerasechain reaction,MSP)法检测20例正常卵巢组织,25例良性卵巢肿瘤,56例卵巢上皮性癌中hMLHl、hMSH2基因启动子区的甲基化状态;同时检测5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理前后卵巢癌细胞SKOV3和3AO中hMLHl、hMSH2甲基化状态的改变;逆转录聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测5-Aza-CdR(0.5μm/L)处理前后卵巢癌细胞株中hMLHl和hMSH2 mRNA表达水平的改变。【结果】正常卵巢组织中均未见hMLH1、hMSH2启动子的甲基化;良性卵巢肿瘤中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为4.0%(1/25)、8.0%(2/25);卵巢上皮性癌中hMLHl和hMSH2甲基化阳性率分别为30.4%(17/56)、51.8%(29/56);hMLH1和hMSH2甲基化与肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞后,可部分或全部逆转hMLHl和hMSH2启动子区的甲基化,细胞株的hMLHl和hMSH2 mRNA表达均有不同程度的增加。【结论】DNA错配修复基因hMLHl、hMSH2甲基化与卵巢癌的发生发展相关,是卵巢癌发生中的早期基因改变,有可能成为卵巢癌早期诊断,评价疗效和判定预后的分子生物学指标。hMLHl和hMSH2甲基化与其mRNA表达密切相关,是表达调节的重要方式之一,这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转。第二部分5-氮-2’-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞增殖凋亡及DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2表达的影响【目的】观察DNA错配修复基因(mismatch repair genes,MMR)hMLHl、hMSH2在人卵巢癌细胞SKOV3和3AO中的表达情况,研究5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对SKOV3和3AO增殖凋亡及hMLHl和hMSH2表达的影响,寻求卵巢癌治疗的新靶点。【方法】用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR 0.5、5、50gmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO 3d,继续常规培养7d后,采用四唑盐(MTT)比色法观察细胞经药物处理前后的生长活性,用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析5-Aza-CdR对细胞凋亡的影响,以半定量逆转录—聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测卵巢癌细胞经5-Aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLHl和hMSH2 mRNA的表达水平的改变。【结果】人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-Aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50gmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速度下降。SKOV3各组细胞的凋亡率分别为(10.59±+1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,显著高于对照组的(5.35±0.86)%(P<0.01);3A0各组细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,显著高于对照组的(3.39±0.71)%(P<0.01);细胞凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,PSKOV3<0.01; F3AO=108.4,P3AO<0.01)。经5-Aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLHl和hMSH2的mRNA表达量有不同程度的增加(P<0.01),且与药物存在剂量依从性。【结论】在人卵巢癌细胞SKOV3和3AO中,5-Aza-CdR可部分逆转hMLHl和hMSH2的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡。