【摘 要】
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组蛋白乙酰化的水平是由组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)和组蛋白脱乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)共同作用决定的,HDACs通过调节染色质结构在基因的表达
【出 处】
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中国科学院华南植物园 中国科学院华南植物研究所
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组蛋白乙酰化的水平是由组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)和组蛋白脱乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)共同作用决定的,HDACs通过调节染色质结构在基因的表达调控中起着重要的作用。水稻中总共含有18个HDACs成员,分为3大家族:RPD3/HDA1家族14个成员、SIR2家族2个成员、HD2家族2个成员。为了了解水稻中HDACs的生物学功能,本研究利用生物信息学和分子生物学方法对它们的功能进行了分析,得到如下结果:
1.利用生物信息学方法分别对RPD3/HDA1、SIR2和HD2家族成员的结构进行了研究,发现水稻RPD3/HDA1 HDACs蛋白质可分为Class I、Class II、ClassⅢ和Class IV四类,除了HDA707外的所有HDACs均含有保守的结构域、组氨酸残基和半胱氨酸残基,另外Class I HDACs中,除了HDA707外其它成员还有N-糖基化位点(NWS)。SIR2家族和HD2家族中各成员均含有数量不同的蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶II磷酸化位点;多序列比对发现水稻SIR2家族成员sirtuin结构域和HD2家族的nucleoplasmin结构域与玉米及拟南芥中的一样是高度保守的;电子表达谱分析表明水稻中这18个HDACs成员的在器官(组织)的表达模式不同,如SRT701主要表达于叶片和花序,SRT702表达于整个植物中;HDT701表达于整个植物中,HDT702主要表达于花序。
2.利用RT-PCR方法检测水稻HDACs基因的表达模式,结果表明:不同的HDACs的空间表达模式不同,如HDA702,HDA704, HDA712, HDT701和SRT701在根、茎、叶中均表达,HDA706和,SRT702在茎和叶中表达,HDA714在叶中表达,HDA705和HDT702在根中表达。此外,JA能诱导HDA705和HDT701的表达;SA和JA能诱导HDT702的表达:ABA降低SRT701和SRT702的表达,抑制HDT701的表达。低温、甘露醇和NaCl都降低SRT701和SRT702的表达,而甘露醇和NaCl增强HDA702的表达。表明水稻中不同的HDACs基因有不同的表达模式,并且可能参与JA、SA和ABA信号的传导和对环境胁迫的应答。
3.利用RT-PCR分别克隆了HDA714、SRT701和HDA705 cDNA,并进行了测序分析,成功得到了HDA714和SRT701的全长cDNA及HDA705部分序列(600bp左右),在此基础上,PCR扩增分别得到了HDA714和SRT701 ORF,为通过转基因技术来研究这些基因的功能打下了基础。另外,还通过PCR方法扩增得到了HDA702的特异序列并进行测序分析,得到了HDA702的目的片段,并成功构建了pMD18T-HDA702重组质粒,为利用RNAi技术研究该基因的功能奠定了基础。
4.通过农杆菌介导法将拟南芥AtHDA6/AtHDA19两个基因转入到了水稻日本晴品种的愈伤组织中,经抗生素筛选成功得到了抗性愈伤组织。利用荧光显微镜观察,发现所得到的抗性愈伤组织在蓝光下有强烈的绿色荧光信号出现,目前正在进行分化试验。该研究为通过异源表达进一步验证AtHDA6/AtHDA19的功能打下了基础。
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