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第一部分氟西汀对早期APP/PS1转基因AD小鼠行为学的作用目的研究氟西汀干预后,早期APP/PS1转基因AD小鼠行为学的改变,确定氟西汀是否能够改善早期AD小鼠空间学习能力及记忆能力。为进一步研究氟西汀干预后,AD小鼠的病理学改变及未来氟西汀在AD临床治疗中的应用提供理论基础。方法选取20只8月龄雌性APP/PS1转基因AD小鼠,随机分成对照组(APP/PS1,n=10)和干预组(APP/PS1+FLX,n=10),每天上午固定时间给予干预组小鼠腹腔注射氟西汀(10 mg/kg/d),对照组小鼠注射相同剂量的生理盐水,注射时间共计9周。干预期间,所有AD小鼠均饲养在标准环境中并定时称重(1周1次)。干预8周后,注射氟西汀同时用Morris水迷宫检测AD小鼠的空间学习能力和记忆能力。测试内容包括前5天的定位航行测试和第6天的空间探索测试。在定位航行测试中,寻找隐藏平台所需时间即逃避潜伏期作为评估空间学习能力的指标;在空间探索测试中,穿台次数及目标象限游泳时间百分比作为评估空间记忆能力的指标。实验中记录的数据包括运动轨迹,逃避潜伏期,穿台次数以及目标象限游泳时间百分比。结果1.氟西汀或生理盐水干预前后,组内AD小鼠体质量无显著性差异,组间AD小鼠体质量无显著性差异(p>0.05)。2.Morris水迷宫测试中,定位航行测试结果显示,干预组小鼠的逃避潜伏期显著性低于对照组小鼠(p<0.05)。其中,第1、2、4、5天干预组小鼠逃避潜伏期显著性低于对照组小鼠(p<0.05)。第3天干预组小鼠的逃避潜伏期较对照组小鼠无统计学差异(p>0.05)。3.空间探索测试结果显示,干预组小鼠的穿台次数较对照组小鼠无统计学差异(p>0.05);干预组小鼠的目标象限游泳时间百分比较对照组小鼠无统计学差异(p>0.05)。结论1.持续9周的氟西汀干预,两组AD小鼠体质量无明显改变,提示氟西汀无明显毒性作用。2.氟西汀干预后,早期AD小鼠在Morris水迷宫测试中逃避潜伏期显著性缩短,提示氟西汀干预对AD小鼠空间学习能力有改善作用。第二部分氟西汀对早期APP/PS1转基因AD小鼠海马胆碱能神经元的作用目的探究氟西汀干预后,APP/PS1转基因AD小鼠海马胆碱能神经递质及各亚区胆碱能神经元数量的变化,为进一步揭示氟西汀改善AD小鼠空间学习能力的结构基础及未来氟西汀的临床应用提供理论依据。方法Morris水迷宫测试后,从两组小鼠中各随机选取5只,麻醉后断颈处死快速分离出大脑,冰上分离出海马组织,随机选取一侧海马组织进行酶联免疫吸附试验(ELISA)测定乙酰胆碱(ACh)含量及胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。各组其余5只小鼠麻醉后进行4%多聚甲醛灌注,分离出大脑组织后再随机抽取一侧大脑半球,经蔗糖梯度脱水,冰冻切片包埋剂包埋后于冰冻切片机上切取50μm的连续冠状切片,依照体视学抽样方法对海马组织切片进行等距离随机抽样,共获得5组含有海马组织的等距随机切片。随机选择一组等距切片进行免疫荧光染色观察胆碱能神经元,随机选择另一组等距切片进行免疫组织化学染色并利用体视学光学分合法计数海马各亚区胆碱能神经元数量。结果1.氟西汀干预后,ELISA结果显示,干预组小鼠海马内ACh含量显著性高于对照组小鼠(p<0.05);干预组小鼠海马内ChAT活性与对照组小鼠无统计学差异(p>0.05)。2.免疫荧光结果显示,干预组小鼠海马内胆碱能神经元较对照组小鼠密集。3.体视学计数结果显示,干预组小鼠海马DG区胆碱能神经元数量显著性高于对照组(p<0.05);干预组小鼠海马CA1区胆碱能神经元数量显著性高于对照组(p<0.05);干预组小鼠海马CA2-3区胆碱能神经元数量与对照组无统计学差异(p>0.05)。结论1.连续9周的氟西汀干预能够增加早期AD小鼠海马内ACh含量,表明氟西汀干预可能促进了早期AD小鼠海马ACh的释放。2.氟西汀能够增加早期AD小鼠海马DG、CA1区胆碱能神经元数量,表明氟西汀可能对胆碱能神经元有一定的保护作用。3.氟西汀增加早期AD小鼠海马ACh含量及DG、CA1区胆碱能神经元数量可能是氟西汀改善AD小鼠空间学习能力的结构基础之一。