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第一部分中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变研究肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤相关死亡率中居首位。其中,约85%是非小细胞肺癌,主要包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等。近来年,尽管外科手术治疗、肿瘤含铂化疗和以吉非替尼、厄罗替尼为代表的靶向治疗等取得了长足的发展,但全球范围内非小细胞肺癌的5年生存率仍只有10%-15%。研究表明,磷脂酰肌醇3激酶(P13K)通路与肿瘤生成密切相关。靶向于P-13K通路成员的抑制剂被证明有明显抗肿瘤作用并已进入临床试验。然而,对PIK3CA基因突变、扩增以及PI3K P110 α, p-Akt, mTOR, PTEN表达的综合分析罕有报道。中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变及与其他驱动癌基因突变关系仍不很清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群PIK3CA基因突变现状并有助P13K靶向药物患者选择。基于以上情况,我们开展本部分研究,回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1117例临床肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。对PCR产物进行基因测序检测PIK3CA(9号外显子和20号外显子),EGFR(18-21号外显子),KRAs(2号和3号外显子),HER2(18-21号外显子),BRAF(11-15号外显子),AKT1(2-3号外显子)的基因突变以及ALK(EMLL4-ALK，KIF5B-ALK和TFG-ALK)基因融合情况。对研究中发现的PIK3CA突变标本及野生pIK3CA对照标本(连续收集自2008年7月至2009年6月肺鳞癌、腺癌野生PIK3CA样本),以荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)法检测PIK3CA基因拷贝数,以免疫组织化学法(immunohistochemical,IHC)检测PI3K P110 α, p-Akt, mTOR和PTEN的表达。研究发现,1117例非小细胞肺癌中共有34例PIK3CA基因突变,807例腺癌和310例鳞癌中PIK3CA的突变频率分别为2.7%和3.9%。在34例PIX3CA突变中,17例伴EGFR突变,4例伴KRAS突变。PIK3CA基因突变与PI3K P110α(p=0.0001), p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表达呈正相关,但与PIK3CA基因拷贝数无明显相关性(p＝0.463)。仅存在PIK3CA突变患者的总生存时间较pIK3CA-EGFR/KRAs共突变者明显缩短(p=0.004)。在无EGFR/KRAS突变的亚组,PIK3CA突变提示预后不良。本部分研究成果表明,中国人非小细胞肺癌患者PIK3CA基因突变多合并有EGFR或KRAS突变；单一PIK3CA突变提示预后不良：无EGFR/KRAS突变亚组PIX3CA突变提示预后不良。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动突变筛选提供参考,有利于PIK3CA靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。第二部分中国人非小细胞FGFR融合基因研究肺癌是世界范围内最常见的癌症致死原因,占所有肿瘤死亡病例的约18%。其中,非小细胞肺癌占所有肺癌的85%左右,大部分非小细胞肺癌患者在被发现时已为晚期从而失去手术根治的机会。随着对非小细胞肺癌遗传学研究的深入,针对特定驱动突变的靶向药物已被证明可以使肿瘤产生明显的消退,并显著延长患者无疾病生存期。近来,致癌融合基因如RET融合基因抑制剂凡德他尼(Vandetanib)和卡博替尼(Cabozantinib),ALK与ROS1融合基因抑制剂克唑替尼(Crizotinib)已被证明可有效治疗特定亚型的肺癌。但是,东亚人群中,仍然有30%的吸烟肺腺癌和88%的肺鳞癌尚没有明确驱动基因突变／融合。新近研究表明,成纤维细胞生长因子受体(FGFR)融合基因与肿瘤生成密切相关,靶向于FGFR的抑制剂有明显抗肿瘤作用并已进入前期临床试验。然而对非小细胞肺癌FGFR融合基因及与其他驱动基因关系的研究罕有报道,中国人非小细胞肺癌FGFR基因融合情况仍不十分清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群FGFR融合基因现状并有助于FGFR靶向药物患者选择。本项研究第二部分回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1328例临床非小细胞肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR。直接测序检测FGFR1,FGFR2,FGFR3基因融合情况,并分析患者EGFR.KRAs,HER2和BRAF突变、ALK、RET、RoS1融合基因情况以及患者临床病理特征。对研究中发现的FGFR融合基因突变标本与野生FGFR对照标本(连续收集自2011年7月至2012年12月的肺鳞癌样本),以免疫组织化学法(immunohi stochemical, IHC)检测FGFR1，FGFR2,FGFR3表达。研究发现,1328例非小细胞肺癌中有17例FGFR融合基因,其中15例为FGFR3-TACC3,2例为BAG4-FGFR1,并且与其他基因突变/融合不共存。有吸烟史(P<0.001),肿瘤直径>3cm (P<0.001)的男性(P=0.002)鳞癌(p<0.001)患者更易出现FGFR基因融合,腺癌FGFR融合基因样本中多含实体亚型。FGFR融合基因状态与免疫组织化学表达呈正相关,FGFR基因融合与患者的总生存时间以及无复发生存时间无明显相关性。本课题的研究成果表明,中国人群中1.3%的非小细胞肺癌、3.50%的肺鳞癌中存在FGFR基因融合。肿瘤最大径大于3厘米的吸烟鳞癌患者更易出现FGFR融合基因。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动基因突变／融合筛选提供参考,有利于FGFR靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。