Th17细胞在脓毒症中的作用机制研究

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背景:Th17是新近发现的一种独立的辅助性T细胞亚群,以分泌IL-17为主要特征。该细胞在防御胞外细菌感染、介导慢性免疫炎症、自身免疫疾病以及肿瘤免疫中发挥重要作用。已证实IL-17与肺炎克雷白杆菌、啮齿枸橼酸杆菌、幽门螺旋杆菌、沙门氏菌、白色念珠菌、乙肝病毒以及寄生虫等病原菌所致感染的转归密切相关。但就目前研究现状而言有以下问题仍未解决:1、Th17在脓毒症发病中的免疫调节机制;2、单核细胞在脓毒症发病的免疫机制中占有核心地位,Th17与单核细胞的关系。目的:探讨Th17在脓毒症发病中的免疫调节机制及与单核细胞间的相互作用关系。方法:本实验共分四个部分实验一:APACHEⅡ评分与脓毒症患者预后关系的研究收集脓毒症患者体温、白细胞计数、C反应蛋白、动脉血乳酸、血糖等临床资料,统计学分析APACHEⅡ评分与预后的关系。实验二:Th17在脓毒症发病中作用机制的研究根据疾病严重程度,将脓毒症患者分为脓毒症、重症脓毒症与脓毒性休克三组。进行全血细胞刺激培养、胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测,Flowjo软件分析Th17表达频率。实验三:单核细胞在脓毒症发病中作用机制的研究按上述分组方法,对入组患者全血标本进行细胞染色,流式细胞仪检测,Flowjo软件分析单细胞亚群组成比例以及HLA-DR、CD14平均荧光强度。实验四:单核细胞与Th17间的相互作用关系分离健康人PBMC,在不同LPS浓度下进行细胞培养3天,随后进行细胞内因子染色与流式细胞仪检测,Flowjo软件分析Th17表达频率。结果:实验一:脓毒症患者APACHEⅡ评分与C反应蛋白、动脉血乳酸以及血糖呈正相关关系;APACHEⅡ评分与预后呈显著负相关关系(r=-0.667,P<0.001);三组脓毒症患者间APACHEⅡ评分均有显著性差异(P<0.01)。实验二:脓毒症患者Th17表达频率升高,较健康对照组差异显著(p<0.01),Thl表达差异不显著(P=0.062);按疾病严重程度分四组后,脓毒症组与重症脓毒症组间差异不显著(P=0.076),其余各组间均具有显著差异(p<0.01),其中重症脓毒症患者Th17表达频率最高,脓毒性休克组频率最低;脓毒症患者Th17表达频率与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.299,P=0.014)。实验三:脓毒症患者单核细胞绝对计数较健康对照组升高(P<0.05);三组脓毒症患者CD14+CD16+亚群较正常对照组显著升高(P<0.01);脓毒症患者单核细胞HLA-DR、CD 14平均荧光强度均较健康对照组明显降低,并随着脓毒症患者病情由轻到重而逐渐下降,即脓毒症组>重症脓毒症组>脓毒性休克组。实验四:加入LPS刺激的PBMC Th17表达频率较高,LPS浓度为20ng/m1时Th17表达频率最高为5.87%。结论:1. APACHEⅡ评分可以较好的反映脓毒症患者预后;2.Th17在脓毒症发病的免疫机制中可能发挥重要作用;3.激活的单核细胞可以促进Th17分化与扩增;CD14+CD16+单核细胞亚群起主要促进作用。
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