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褶纹冠蚌(Cristaria plicata)是我国重要的淡水育珠蚌之一,易受病原体感染而发生疾病,对育珠能力会产生较大的影响,因此,开展对贝类分子免疫的研究具有重要意义。本文采用了巢氏PCR方法和RACE PCR技术克隆得到了褶纹冠蚌的Sigma型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因的cDNA序列。CpGST1 cDNA序列全长为1610 bp,其中690 bp的开放阅读框编码230个氨基酸,5’端非编码区320 bp,3’端非编码区600 bp。预测编码的蛋白分子量为25.8 kD,等电点为8.87,由SignalP软件分析发现没有信号肽。克隆得到的CpGST2 cDNA长为826 bp,其中642 bp的开放阅读框编码213个氨基酸,5’端非编码区151 bp,3’端非编码区33 bp。预测编码的蛋白分子量为23.9kD,等电点为6.67,由SignalP软件分析发现没有信号肽。通过对CpGST1和CpGST2基因在褶纹冠蚌不同组织中的表达分析发现,在血淋巴、肝胰腺、闭壳肌、外套膜、鳃组织中均有表达,但表达存在一定的差异。CpGST1和CpGST2都在血淋巴中的表达量最低,其次是闭壳肌和外套膜,而在肝胰脏中的表达量最高。经嗜水气单胞菌刺激后,两个基因在血细胞和肝胰脏中的表达都表现出显著或极其显著差异。本文还将基因扩增产物和表达载体PET-32a经HindIII、XhoI双酶切之后,连接并成功构建了PET-32a-CpGST2原核表达质粒。将该质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中,加IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导8 h,得到大量融和蛋白,用Ni2+亲和层析镍柱纯化,并测得其纯化蛋白的活性为46.965±0.082μmoL/min/mg。