论文部分内容阅读
[研究背景] 近年来的研究表明呼吸道病毒感染与支气管哮喘关系密切。哮喘的本质是一种慢性气道炎症性疾病。我们临床研究显示柯萨奇病毒B组 (Coxsackie virus B,CVB)在呼吸道感染中有较高的感染率,并且显示CVB感染与哮喘发作关系密切,小儿哮喘中有高的CVB感染率。本实验室还成功复制出单次CVB感染致气道炎症和气道高反应性的动物模型。国内外鲜有CVB致气道炎症机制的研究。核因子-κB(nuclear factor-kappaB)是近年发现的重要的转录因子之一,在机体的免疫应答、炎症反应等方面发挥着重要作用,NF-κB在哮喘发病中的重要地位已经在很多研究中得到证实。[研究目的] 本实验建立在大鼠CVB3感染模型上,观察不同条件感染状态下气道炎症的变化,探讨CVB3感染与气道炎症关系,以及病毒与过敏原导致的气道炎症的相互作用。并进一步观察CVB3感染动物肺组织NF-κB的表达,同时初步观察不同感染状态哮喘患儿外周血单个核细胞中NF-κB的表达。[研究方法] 1. 病毒致气道炎症:Wistar大鼠35只,分7组,对照组1组(C),3只;CVB3病毒吸入组共5组,其中又分单次病毒吸入组(2w,4w)共2组(V2w、 V4w ),各5只;重复病毒吸入组1组(V+V),6只;病毒吸入合并卵蛋白致敏(腹腔、鼻腔)共2组,各5只(V+OVA1,V+OVA2);卵蛋白致敏组1组(OVA),6只。卵蛋白致敏予腹腔或鼻腔致敏。病毒吸入各组用微量移液器滴入CVB3 悬液。暴露后14天,采用ELISA 间接法测定CVB3抗体。 重复病毒吸入组和病毒吸入合并卵蛋白致敏组,于第14天再次鼻腔滴入病毒。病毒吸入2w组,于第14天处死。余第28天全部处死。采样观察肺组织病理改变。HE染色法镜下观察炎症细胞浸润,并用甲苯胺蓝改良染色法镜下显示肥大细胞。2. 肺组织NF-κB的表达:Wistar大鼠,16只,病毒组10只,对照组6只,超声雾化吸入 CVB3 悬液后14天采样,免疫组化法检测肺组织中NF-κB的表达。3. 患儿外周血单个核细胞(PBMC)中NF-κB的表达:入院患儿12例,正常对照3例,哮喘无CVB感染4例,哮喘CVB感染5例,入院第2日取外周静脉血流<WP=7>式细胞术检测PBMC中NF-κB的表达。[研究结果] 1、气道炎症的观察:病毒吸入组大鼠(2周)血清中CVB3-IgM的OD值均在对照组的(x+2s 以上,两组间均数(病毒组:0.130±0.080,对照组:0.060±0.023)相差非常显著,P<0.01。(1)单次病毒吸入2w组炎症细胞(320.850110.998)及肥大细胞(20.4508.268)计数均高于4w组(187.88017.074及7.4001.915),差异有统计学意义, P<0.01。(2)重复病毒吸入组炎症细胞计数(298.93385.731)高于单次病毒吸入4w组,差异有统计学意义,P<0.01;与单次病毒吸入2w组比较,差异无统计学意义。(3)病毒合并腹腔、鼻腔致敏2组炎症细胞及肥大细胞计数,明显高于单纯卵蛋白致敏组(74. 9 00 28. 493及3. 4 2 93. 0 03),差异有统计学意义, P<0.01。但2组间(病毒合并腹腔致敏组:201.88655.777及 5.4002.327,病毒合并鼻腔致敏组:184.16043.828及 7.0502.625)比较差异均无统计学意义。(4)单纯卵蛋白致敏组炎症细胞及肥大细胞计数远低于单次病毒吸入4w组,但高于正常对照组(34.86616.698及0.8670.516),差异有统计学意义,P<0.01。(5)各组炎症细胞均数与肥大细胞均数的相关系数r=0.80729,在α=0.05水准上认为炎症细胞计数与肥大细胞计数正相关。2、 CVB感染动物肺组织和哮喘患儿外周血单个核细胞中NF-κB的表达:(1)肺组织NF-κB的表达的观察:病毒组与正常对照组比较,肺组织表达NF-κB的强度相差显著,P≤0.0l。气道上皮细胞NF-κB免疫组化染色核阳性的细胞比例(%),病毒组(41.808.24)明显高于对照组(15.334.32),差异有统计学意义,p<0.01。(2) NF-κB在PBMC的表达的观察:哮喘CVB感染组淋巴细胞NF-κB的荧光强度(733.19±209.06)明显高于哮喘无CVB感染组(381.32±107.84),差异有统计学意义,p<0.05。[研究结论] 1、鼻腔滴入病毒亦可建立CVB3致气道炎症的动物模型。2、CVB3感染2周左右为气道炎症病变的高峰期。3、重复CVB3病毒吸入与单次病毒吸入(V2w )比较气道炎症表现无明显差异,提示重复暴露并没有加重气道炎症程度。4、CVB3病毒暴露可加强过敏原导致的炎症反应。 卵蛋白鼻腔致敏与腹腔致敏有同样的效果。 5、 CVB3可上调支气管上皮细胞NF-κB的表达和DNA结合活性。6、CVB感染可能上调哮喘儿淋巴细胞NF-κB的表达。