研究背景 化疗后脱发(chemotherapy-induced alopecia，CIA)是化疗药物常见的副作用之一，给患者心理上带来很大的痛苦，从而降低了患者对化疗的依从性，所以化疗后脱发的防治是肿瘤治疗中急待解决的问题。 化疗是恶性肿瘤综合治疗常用的一种手段，但在治疗的同时又引起许多的副作用，如化疗后的脱发。毛囊是一个具有生长期、退行期和休止期三个阶段周期循环的微小器官，毛囊细胞对抗肿瘤药物的敏感性取决于细胞所处的增殖状态，由于生长期毛囊毛母质细胞有较高的增殖率，故生长期毛囊极易受到许多化疗药物的强烈影响。 化疗后脱发的机制在于化疗药物诱导生长期毛囊内细胞凋亡，导致生长期毛囊成熟障碍，提前进入退行期。近年来许多学者对化疗后脱发的防治进行了诸多研究，如采用MSC头皮冷却系统、细胞周期素依赖性激酶(CDK)抑制剂、Sonic hedgehog基因转染等方法治疗，但效果并不尽如人意。 多年来，我国在应用中药防治化疗毒副作用和提高肿瘤细胞对化 南京医科大学硕土学位论文疗的敏感性的研究中，已取得许多进展，已有较多文献报道中药在化疗中的减毒增效作用16一91。此外，许多学者用中药治疗如斑秃、男性脱发等脱发性疾病已具有丰富的实践经验I’0一”」，但应用于化疗后脱发的防治还缺乏深入研究，且少有实验室数据的支持。国内范卫新和朱文元等以体外培养的鼠毛囊为模型，研究发现齐墩果酸、女贞子、黄茂等中药对毛囊有明显促生长作用【‘21，其机制可能与中药促进毛囊细胞合成和分泌如HGF、vEGF等细胞因子有关l”]。这些细胞因子在体外已经被证实具有促进毛发生长的作用l’“]。中药对化疗后脱发的影响如何，值得我们进一步深入研究。目的 本研究以体外培养的猪毛囊及体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞为研究对象，探讨何首乌、黄茂、女贞子、川芍4味中药的混合煎剂对猪毛囊毛发生长和阿霉素诱导的毛囊细胞损伤的影响，为临床上应用中药防治化疗后脱发提供理论依据。方法 实验一:何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。 用MTT法通过比色分析测定光密度值(OD)，检测不同剂量(0、5、10、20m留L)阿霉素作用24h和IOmg/L阿霉素作用不同时间(4、8、12、24、48h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用24h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率，从而找出用于以下研究中阿霉素的最适浓度。用MTT法检测不同剂量中药 南京医科大学硕土学位论文煎剂和lomg几阿霉素同时给药共同作用24h以及先给予不同剂量中药煎剂作用24h，然后给予lomg几阿霉素作用24h两种条件下对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。 实验二:何首乌、女贞子等中药煎剂对体外培养的猪毛囊毛发生长的影响。 离体培养的猪毛囊分为对照组(WilliamSE培养基)和中药组(WilliamSE培养基+中药煎剂)，显微镜下观察各组毛囊毛发生长和毛球部形态变化，并用末端脱氧核普酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测各组毛囊中的凋亡细胞。 实验三:何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素诱导的猪毛囊细胞凋亡的影响。 离体培养的猪毛囊分为阿霉素组、中药煎剂+阿霉素组，显微镜下观察各组毛囊毛发生长和毛球部形态变化，并用TUNEL法检测各组毛囊中的凋亡细胞。结果 实验一:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖，其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强;细胞凋亡率随阿霉素浓度增大而升高，阿霉素浓度为lomg几时细胞凋亡率最高。中药煎剂和10mg/L阿霉素同时给药条件下，中药煎剂不能有效升高oD值(与不用中药的情况比较，尸>0 .05);先给予中药处理，然后给予10mg几阿霉素，中等剂量的中药煎剂能有效升高OD值(与不用中药的情况比较，P<0.001)。南京医科大学硕十学位论文 实验二:培养第7天，对照组毛囊毛发生长长度低于中药组(P<0 .001);对照组毛囊TLJNEL阳性细胞数明显高于中药组(P<0 .001);毛球形态观察，对照组毛囊出现退行性变化，而中药组毛囊仍维持生长期毛囊形态。 实验三:培养第4天，阿霉素组毛囊毛发生长长度明显低于阿霉素+中药煎剂组(尸<0.001);而且前者毛囊TIJNEL阳性细胞数明显高于后者(尸<0.001);毛球形态观察也提示毛囊退行性变化在前者较后者更明显。结论 何首乌、黄茂、女贞子、川茸4味中药的混合煎剂能促进体外培养的猪毛囊毛发生长，减轻阿霉素诱导的毛囊细胞损伤，其机制可能是中药煎剂抑制了毛囊内细胞凋亡。本研究提示上述中药的混合煎剂对化疗后脱发具有一定的防护作用。