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本研究通过Western blot方法对大肠杆菌乳房炎分离株进行菌体蛋白分析，找出了主要免疫原性蛋白为约33kDa的膜蛋白，应用超声破碎、超速离心、电洗脱等方法对其进行纯化，以其作为包被抗原，建立了间接ELISA方法。
以膜蛋白作为抗原包被酶标板，通过对ELIsA各反应条件的优化，确定了最佳反应条件为：抗原的最佳包被缓冲液为0.01M pH7.2的PBS；抗原最佳包被浓度为0.25μg/mL；最佳封闭液为5％脱脂奶粉，封闭条件为37℃1h；最佳血清稀释液为5％脱脂奶粉，血清稀释倍数为100倍；HRP-兔抗牛IgG的最适工作浓度为1/20 000。采用已确立的ELISA反应条件，对210份阴性血清的检测结果进行统计学分析，确定了间接ELISA方法阳性血清判定标准，即OD<,450>值大于等于0.32为阳性，小于0.32为阴性。应用建立的间接ELISA方法对72份乳房炎疫苗免疫牛血清和224份未免疫牛血清的检测结果表明，ELISA方法的特异性为93％，敏感性为72.2％。
采用建立的间接ELISA方法对奶牛乳房炎多联灭活疫苗免疫牛血清中大肠杆菌特异性抗体水平进行了检测，揭示了疫苗免疫牛大肠杆菌抗体水平的动态变化，为该疫苗临床应用效果评价提供依据。