肺腺癌患者血清蛋白质组成分的双向凝胶电泳—质谱分析

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肺癌是当今世界常见恶性肿瘤之一,已成为绝大多数国家癌症死亡的首要原因。肺癌的发病机制仍不清楚,而其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势,如何做到早期发现肺癌成为防治的关键。蛋白质组学研究方法和技术为肺癌的早期诊断和防治的研究提供了有利条件。 【目的】利用蛋白质组学方法,建立分辨率高和重复性好的人肺腺癌及其正常人血清蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质,从而寻找肺腺癌早期特异性的诊断指标。 【方法】 (1)收集8例肺腺癌患者血清及4例正常人血清,于-80℃冰箱保存。用SwellGel? Blue白蛋白去除试剂盒过滤血清,并用Bradford法测定其滤液总蛋白浓度,然后分装冻存用于分析。 (2)应用固相IPG梯度双向凝胶电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白,凝胶经银染或考马斯亮蓝(Coomnassie blue)染色显色后,用Gs-800光密度仪获得凝胶图像。经PDQuest凝胶图像分析软件进行分析后,找出有差异的蛋白点。 (3)将部分差异的蛋白点从凝胶上挖下,胰蛋白酶进行胶内原位酶解,经Voyager-DETM PRO MALDI-TOF-MS仪分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot查询
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