【摘 要】
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目的碱蓬(Suaeda salsa(Bunge))是一种一年生草本植物,其含有多种具有生物功能的大分子。本实验旨在优化碱蓬多糖(Suaeda salsa polysaccharide)的纯化工艺,建立其分离纯化方法,对其结构进行表征,并验证碱蓬多糖可诱导MCF-7细胞凋亡。方法以碱蓬为原料,采用水提醇沉法提取粗多糖。经Sevag法去除蛋白质以及活性炭吸附脱色后,通过DEAE-52纤维素柱和Seph
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目的碱蓬(Suaeda salsa(Bunge))是一种一年生草本植物,其含有多种具有生物功能的大分子。本实验旨在优化碱蓬多糖(Suaeda salsa polysaccharide)的纯化工艺,建立其分离纯化方法,对其结构进行表征,并验证碱蓬多糖可诱导MCF-7细胞凋亡。方法以碱蓬为原料,采用水提醇沉法提取粗多糖。经Sevag法去除蛋白质以及活性炭吸附脱色后,通过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-75凝胶柱进一步分离纯化碱蓬粗多糖,得均一组分SSP2-2。采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC,High-performance gel permeation chromatography)、PMP-柱前衍生高效液相色谱法(PMP-HPLC,PMP precolumn derivatization HPLC)、红外吸收分光光度法(IR,Infrared absorption spectrophotometry)、核磁共振波谱法(NMR,Nuclear Magnetic Resonance)对SSP2-2进行纯度验证及结构表征。通过MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)检测法、Hoechst33342染色法、流式细胞术(Flow cytometry)、线粒体膜电位检测法(MMP,Mitochondrial membrane potential)及蛋白质分子印迹法(Western blot)对SSP2-2诱导MCF-7细胞凋亡进行研究。结果SSP2-2重均分子量(M_w,Weight-average Molecular Weight)为53.8 kDa;PMP-HPLC显示SSP2-2主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖六种单糖组成,摩尔比为0.6:8.0:1.0:83.6:5.0:7.2;IR表明SSP2-2中含有糖醛酸、β-糖苷键等特征吸收。NMR表明SSP2-2为吡喃糖,并存在C-1连接。MTT提示SSP2-2对人乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抑制作用;Hoechst 33342染色实验结果观察到SSP2-2引起MCF-7的细胞核出现皱缩、碎裂等特征;流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI染色法显示SSP2-2可以诱导MCF-7凋亡;线粒体膜电位检测显示SSP2-2导致MCF-7细胞线粒体跨膜电位降低,Western blot结果显示Bcl-2的蛋白表达降低,Bax、cytochrome C、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加,表明SSP2-2通过线粒体途径诱导细胞凋亡。结论本研究从碱蓬中提取分离纯化得到一种均一多糖组分SSP2-2。SSP2-2的分子量约为53.8 kDa,主要由半乳糖醛酸组成,SSP2-2通过线粒体途径诱导MCF-7细胞凋亡。
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