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目的:探讨体外培养的兔骨髓间质干细胞(rBMMSCs)增殖能力和分化为脂肪细胞的能力以及分化过程中过氧化物增殖激活受体γ(PPARγ)基因表达的变化和罗格列酮对脂肪细胞分化、PPARγ表达的影响。研究方法:新西兰大白兔3只,速眠新Ⅱ0.2ml/kg肌肉注射全身麻醉,无菌条件下骨髓穿刺针分别抽取右侧股骨骨髓2ml,采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离rBMMSCs,细胞体外接种传代后以第6代细胞为研究对象,MTT法测细胞生长曲线。随后细胞随机分为两组:1,对照组,予普通培养基继续培养;2,成脂诱导组,予成脂培养基(DMEM-LG培养液,10%FBS,170 nM胰岛素,0.5 mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,0.2mM吲哚美辛,1μM地塞米松,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素)诱导培养21天。成脂诱导组21天后又随机分为普通诱导组和罗格列酮组,前者继续予成脂培养基诱导至第28天;后者在成脂诱导培养基中加入罗格列酮2μM继续诱导至第28天。诱导培养后于7,14,21,28天镜下计数各组脂肪细胞所占百分比,油红O染色检测细胞内脂滴,随后异丙醇洗脱脂滴中油红O,570nm分光光度计检测油红O含量OD值,评价细胞内脂肪含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)于0,7,14,21,28天检测各组PPARγmRNA表达。实验结果:反复传代6次后rBMMSCs仍然具有稳定的增殖能力,所含其他杂细胞较少。成脂诱导组第7、14、21天,普通诱导组第28天及罗格列酮组第28天分化的脂肪细胞比例分别为23.1±4.1%,57.4±3.0%、70.3±3.6%、68.3±3.9%和84.5±4.2%,组间比较发现成脂诱导21天内随诱导时间延长分化的脂肪细胞逐渐增多,罗格列酮组第28天与普通诱导组第28天分化的脂肪细胞含量比较,差异有显著性,P<0.01。油红O染色脂滴呈橙色。570nm分光光度计检测发现成脂诱导组第7、14、21天,普通诱导组第28天及罗格列酮组第28天OD值分别为0.07±0.01、0.21±0.02、0.31±0.06、0.29±0.04和0.46±0.05,组间比较发现成脂诱导21天内随诱导时间延长脂肪含量逐渐增多,罗格列酮组第28天与普通诱导组第28天脂肪含量比较,差异有显著性,P<0.01。RT-PCR检测发现PPARγ/GAPDH比值在第0、7、14、21天、普通诱导组第28天及罗格列酮组第28天分别为0.16±0.008、0.28±0.02、0.42±0.04、0.60±0.09、0.58±0.09、0.87±0.08,组间比较发现成脂诱导21天内随诱导时间延长PPARγ表达逐渐增强,罗格列酮组第28天与普通诱导组第28天PPARγ表达强度比较,差异有显著性,P<0.05。结论:本实验采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法提取的rBMMSCs传代6次后仍然具有稳定的增殖能力;体外培养的兔骨髓间质干细胞能分化为脂肪细胞,可作为研究脂肪细胞分化的实验模型;罗格列酮可增强PPARγmRNA表达,促进rBMMSCs向脂肪细胞分化。