双孢虫草生物学特性研究

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双孢虫草Ophiocordyceps bispora (Stifler) GH. Sung, J.M.Sung, Hywel-Jones & Spatafora是寄生于大白蚁属Macrotermes sp.的虫生真菌,1941年首次发现于非洲东部的坦桑尼亚。2014~2015年本课题组,在云南哀牢山采集到大量双孢虫草,经鉴定和查阅文献发现,亚洲并没有该虫生真菌的记录,属于亚洲新纪录种,该发现丰富了中国的虫草资源。双孢虫草隶属线虫草科Ophiocordycipitaceae GH. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora,线虫草属Ophiocordyceps (Petch) G.H. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora,具有明显区别于该属其他物种的特征:子囊具有长柄,棒状,无子囊帽,一个子囊只有2条子囊孢子。子囊孢子长梭形,两条子囊孢子紧紧贴在一起,成熟后具有7-15个分隔。5基因(nrSSU, nrLSU, tef-1A, rpbl和rpb2)系统发育研究表明,O. bispora与Hirsutella thompsonii Fisher、Hirsutella necatrix Minteret & Brady、Hirsutella minnesotensis Chen,Liu & Chen和Hirsutella cryptosclerotiμm Fernandez Garcia Evans & Samson紧密聚为一支,表明他们有较近的亲缘关系。同横断山区线虫草物种相比较,双孢虫草的系统位置位于横断山区线虫草物种基部,结合双孢虫草独特的子囊及子囊孢子特征,推测双孢虫草可能是横断山区线虫草区系中较为原始的类群。从经典形态分类和ITS分子数据两方面,鉴定出双孢虫草的两种伴生菌为淡色生赤壳Bionectria ochroleuca (Schwein.) Schroers & Samuels和淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson。以菌丝生长面积为指标,筛选出来双孢虫草最适生长碳源为玉米粉;最适生长氮源为蚕蛹粉;最适生长温度为30℃;最适生长pH为9;最佳培养基配方为:玉米粉3%、蚕蛹粉2%、MgSO4 0.15%、KH2PO40.1%。利用分光光度法测定双孢虫草及其菌丝体多糖、D-甘露醇、总皂苷、总黄酮和总三萜。检测结果表明,双孢虫草菌丝体多糖(63.04mg/g)和双孢虫草D-甘露醇(114.33mg/g)均高于冬虫夏草多糖(44.79mg/g)和D-甘露醇(89.20mg/g);双孢虫草及其菌丝体总皂苷、总黄酮、总三萜分别为14.97mg/g和1.61mg/g和34.65mg/g和17.10mg/g,均低于冬虫夏草总皂苷34.30mg/g、总黄酮11.01mg/g、总三萜41.67mg/g。利用HPLC法检测双孢虫草及其菌丝体核苷类成分,双孢虫草与冬虫夏草8种核苷类成分比较表明,有4种核苷类成分即尿嘧啶、肌苷、腺嘌呤、2-脱氧腺苷高于冬虫夏草,其它4种核苷类成分即尿苷、鸟苷、腺苷、胸苷低于冬虫夏草。双孢虫草菌丝体尿嘧啶(819.28μg/g)、2’-脱氧腺苷(785.96μg/g)和腺嘌呤(344.57μg/g)远远高于冬虫夏草尿嘧啶(75.43μg/g)、2’-脱氧腺苷(24.33μg/g)、腺嘌呤(46.80μg/g)。双孢虫草中未检测出胸苷,双孢虫草菌丝体中未检测到腺苷。双孢虫草对黑腹果蝇延缓衰老试验表明,在低浓度(0.5%)下双孢虫草可明显提高果蝇居群平均寿命、最高寿命和半数死亡时间,具有显著的延缓衰老作用。综上所述,双孢虫草属于线虫草科、线虫草属。双孢虫草及其菌丝体活性成分与冬虫夏草相似,双孢虫草菌丝体在低浓度下具有显著的延缓衰老效果。双孢虫草伴生菌经分类鉴定为淡色生赤壳和淡紫拟青霉。双孢虫草及其半生菌均表现出巨大的生防潜能。
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