纳豆激酶液体发酵条件及其酶学稳定性研究

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纳豆激酶(Nattokinase,简称NK)是一种丝氨酸蛋白激酶,最初是从日本传统发酵食品纳豆(Natto)中提取得到的,纳豆激酶具有与链激酶、尿激酶等溶血栓药物同样的溶解血栓作用,比之现用于临床的溶血栓药物,NK具有安全性好,易被人体吸收,作用直接迅速,作用持续时间长,可由微生物发酵生产因而造价低廉等优点,是一种很有潜力的新型溶血栓药物。 本论文在液体发酵生产NK方面进行了研究,得出如下结果: 1.从实验室保存的产纳豆激酶菌种出发,优化液体发酵条件得出:最佳氮源是豆粕粉,最佳碳源玉米粉,碳氮比以1∶1为合适,离子中以Ca2+的影响最大,以0.02%为最佳浓度,Mg2+的是否添加影响不大,磷酸盐以Na2HP4 0.2%∶NaH2PO4 0.1%为最优,Mn2+抑制酶的合成,表面活性剂的添加不影响酶的分泌。细菌在37℃时生长最为迅速,细胞量最大,但对产酶来讲,30℃为最佳温度,故选择30℃作为发酵温度,pH7是细菌生长和产酶的最适pH;该菌种是好氧菌,装液量小利于细菌生长和产酶,但装液量过小,水分挥发过快,不利于NK总产量的提高,故选择100ml/500ml。接种量以2%为最佳,最适种龄为24h。 在以上优化的条件下液体发酵产酶,获得的产酶量为1280IU/ml,是最初产酶量的3倍。 2.NK的最适反应温度为45℃~50℃,酶的稳定性在25℃和37℃时较好,25℃下放置24h残存酶活力为95%,37℃下放置24h残存酶活为78%,55℃以上酶活迅速消失;最适反应pH为7.0~7.5,在pH7~8范围内酶活最为稳定,Hg2+可导致酶的迅速失活,Mg2+对酶有激活作用;牛血清蛋白、甘油、丙二醇、海藻酸钠、蛋白胨,明胶都能提高酶的稳定性,以酪蛋白为底物时的Vm=7.76μg/ml min,Km=10.87×103μg/ml。
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