猪B淋巴细胞刺激因子及其融合蛋白的优化表达、纯化与生物活性研究

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sh_duoduo
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B 淋巴细胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNFfam1ly,BAFF)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的第十七位成员,有膜结合型和可溶型两种形式。BAFF 不仅参与调节B 细胞增殖、分化及抗体的产生,而且还参与T 细胞的活化和应答过程。现已证明BAFF 存在有三个受体:B 细胞成熟蛋白(B cell maturation protein,BCMA)、跨膜激活与CAML作用因子(Transmembraneactivator and CAML-interactor,TACI)和BAFF 受体(BAFF receptor,BAFF-R)。   B 淋巴细胞刺激因子是属于TNF 家族的,对B 细胞分化和存活起着重要作用的一种细胞因子。猪BAFF(pBAFF)的开放读码框由288个氨基酸组成。猪的BAFF在氨基酸水平上与人的BAFF的相似性为88%。在大肠杆菌中表到的猪可溶性BAFF的分子量大约为19kDa。通过镍柱纯化得到的猪BAFF在体外可以促进猪的B 细胞的存活或增殖。这个结果表明猪的BAFF在猪的B 细胞的存活或增殖上起着重要的作用。在大肠杆菌中的优化表达,增加了目的蛋白可靠的生物利用,为进一步的研究奠定了基础。   将猪B 淋巴细胞刺激因子和增强型绿色荧光蛋白通过(Gly4Ser)2linker 相连接,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白EGFP-psBAFF;并对该蛋白进行Ni2+-IDA 亲和层析柱纯化,纯化的蛋白经检测具有EGFP的荧光活性和psBAFF的B 淋巴细胞促存活活性。鉴于其在免疫中的作用,为进一步研究家畜类BAFF 及其受体提供一定的基础。
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