皖东牛白细胞GPR54差异表达与相关基因转录水平关联性研究

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GPR54基因变异会影响牛初情期启动,本研究采集皖东牛(22头)血液样品,提取皖东牛血液白细胞总RNA,通过对样本牛血液GPR54调控区SNPs检测,多态片段基因型鉴定,通过实时荧光定量PCR分析不同基因型GPR54表达水平,采用RNA-Seq技术分析不同基因型牛GPR54与初情期相关基因转录水平及信号通路之关联性。结果表明:  1.检测出皖东牛GPR54基因启动子区SNPs,获得2个位点,基因型组合分别为CCTT(A组)、CTTC(B组)和TTCC(C组)。  2.不同基因型牛的GPR54基因表达水平显示为CCTT>CTTC>TTCC。CTTC型GPR54基因表达水平介于两个纯合型之间。  3.由RNA-seq技术共测了8个样品,平均产生了24136079条原始reads,clean reads平均数目为23739830。与参考基因和参考基因组比对,得出clean reads的平均比对率为分别是59.97%和91.22%。  4.通过RNA-seq检测,A(CCTT型)组和B组(CTTC型)共测得差异基因16719个,其中上调基因6778个,下调基因9920个。通过对差异基因筛选结果进行分析,发现大量与初情期启动相关的基因。如对青春期启动具有抑制作用的GABA、NPY;兴奋性因素有胶质细胞分泌的TGF和IGF,以及GPR54/Kiss-1;另外还有雌激素受体基因(ER)和性激素结核球蛋白基因(SHBG)都与初情期启动相关。  5.通过对差异基因Pathway分析,选择2个富集的通路,包括GnRH信号通路和Estrogen信号通路。分析位于该信号通路的差异基因,发现CaM基因显著下调(P<0.05)。
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