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寒地苹果种质资源是寒地果树资源的宝贵财富,对其深入研究有利于今后更科学有效的保存与利用。本试验主要以RAPD(随机扩增多态性DNA)分子标记为主要研究方法,对寒地苹果种质资源遗传多样性进行研究,以期揭示不同资源间的亲缘关系及其分类地位;寻找不同资源的特有RAPD标记,为今后的资源研究、品种鉴定、育种亲本选择及杂交后代性状预测、早期选择提供依据;并初步构建寒地苹果的核心种质,以便资源的高效管理及遗传多样性的准确利用。主要研究内容如下:1.改进了传统的SDS基因组DNA提取方法,更适于提取富含蛋白质、果胶类多糖及多酚类化合物等次生代谢产物的苹果属植物叶片基因组DNA。2.优化了RAPD反应体系。所得最优反应体系为:反应体积25μl,其中模板DNA 20 ng/μl,引物1.0μl浓度10pM,Tag DNA聚合酶1.0U,dNTP 0.2 mmol/L,PCR Buffer(含Mg2+)2.5μl。扩增程序为:预变性94℃4min,变性94℃45s,退火温度(37℃)45s,72℃延伸120s,共35个循环后,在72℃继续延伸5min,然后在4℃保存。3.利用RAPD技术对寒地苹果266份种质资源遗传变异进行了研究,从200个10 bp随机引物中筛选出25个多态性引物用于正式扩增,共扩增出245条DNA带,其中多态性DNA带229条,多态位点百分比达到93.47%。平均每个引物扩增的DNA带的数目为9.8条。4.有33份资源扩增出了1个以上的特有RAPD标记,据此可以进行资源鉴定或以此为亲本的杂交后代早期选择。5.利用DNA扩增结果构建初级核心种质180份,对其进行再聚类分析,得到如下结论:①验证了前人对山荆子系、海棠系和陇东海棠系亲缘关系的经典分类。但一些野生种的亲缘关系与经典分类学存在差别,有待进一步深入研究。②杂交后代的遗传关系复杂,尚无分类归属,作者提出应将这部分资源在分类地位上单独列出一系——杂种群系的建议。6.首次尝试对寒地苹果种质资源进行核心种质构建,获得46份核心种质,并对核心种质的多样性和实用性进行了检验。以上研究为寒地苹果种质资源的保护、利用奠定了分子标记研究的理论基础,同时,为进一步构建寒地苹果遗传连锁图谱、分子标记辅助育种、重要基因的克隆等奠定了基础。将对寒地苹果的分子遗传学研究产生重要的影响。