密码子优化的轮状病毒VP6蛋白在烟草中的高效表达

来源 :天津师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lpp110894
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轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起全世界婴幼儿和幼龄动物严重腹泻的最重要、最常见的病原。在发展中国家,每年因RV感染发生中度和严重腹泻以及死亡的儿童高达1887万人;在发达国家,因RV感染造成的经济损失是一个不容忽视的问题。据估计美国每年就此一项的医药损失高达2亿6千万美元。鉴于RV危害严重且无有效的治疗手段,世界卫生组织(WHO)将Rv疫苗列为最优先发展的疫苗项目之一。我们对于新型RV疫苗的研究仍在探索之中。植物生物反应器是一种安全和廉价的生物系统。随着分子生物学的发展,特别是植物遗传工程的快速发展,人类可以通过自身的意愿设计和改造植物,高效的生产出廉价的人类生产和生活所需要的各种产品。这种植物反应器的概念,尤其是利用植物生产药用蛋白和工业化酶类的概念,以及植物直接作为口服疫苗的概念,渐渐受到人们的重视和慢慢被人们广泛的接受。本实验尝试利用烟草作为生物反应器生产VP6蛋白。将密码子优化的VP6基因克隆到质粒中,构建植物表达载体pBI121-V6(U)。利用农杆菌介导法转化烟草,经卡那霉素(Kan)多重筛选,获得抗性植株,对抗性植株提取DNA进行PCR分析,表明VP6基因已经整合到烟草的基因组中。转基因植株的western blot显示pBI121-V6(U)的转基因烟草可以有效的表达VP6蛋白。实验结果表明,我们所构建的重组轮状病毒多表位具有一定的免疫原性。本研究为研制重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗、转基因植物口服疫苗提供一条新的途径和方法,具有一定的理论意义和应用前景。
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