甜瓜抗病基因相关序列的克隆及分析

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近年来,甜瓜病虫害在世界各地迅速蔓延、泛滥成灾,给甜瓜的种植带来了极大的影响。尤其是甜瓜霜霉病和枯萎病等真菌病害,爆发频繁,危害性强,往往造成大面积的减产,在部分受灾地区有时甚至会绝收。目前防治甜瓜霜霉病和枯萎病的主要途径仍然是运用化学方法,这对人类的健康和生活环境存在着巨大的潜在威胁。利用传统的杂交育种方法培育适合于种植的抗性品种历时时间很长,相对病害发展往往滞后。虽然大部分的甜瓜种植品种对霜霉病和枯萎病都极易感,但在长期的进化过程中,也有个别的品种具有良好的抗性。开发利用甜瓜自身的抗性基因,通过基因工程技术改良甜瓜抗性品质,目前已被各国甜瓜育种工作者认可,成为新的热点。本文选择新疆甜瓜育种中常用的抗病性好的亲本黄旦子为研究对象,新疆甜瓜栽培品种感病品种伽什、红心脆、抗病品种金丽-2 号作为对照材料,分离克隆新疆甜瓜抗霜霉病和枯萎病相关基因序列。首先,采集霜霉病和枯萎病病原菌,接种诱导甜瓜幼苗,并调查病情。结果与前期资料调查一致。甜瓜诱导后的总RAN 经过选择性的RT-PCR扩增,针对抗霜霉病相关基因的扩增,参照已经克隆的植物抗病基因的保守结构特点,设计合成了5 对简并性引物,针对抗枯萎病基因的扩增,根据已经在别的甜瓜品种中克隆到的抗枯萎病基因的序列特征设计简并行引物。实验分离获得了抗霜霉病基因相关cDNA 序列mp-19 和抗枯萎病基因Fom-2 的部分序列(命名为X-Fom-2)。以mp-19、X-Fom-2 分别为探针进行分子杂交。Southern 杂交结果表明这两个基因确实存在于新疆甜瓜黄旦子基因组中,在感病品种伽什、红心脆,及另一抗病品种金丽-2 号基因组中也存在,且很能可能都为多个拷贝。
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