目的:1、建立稳定的小型猪同种异体胰腺移植模型;2、观察低温保存对供胰功能的影响;3、探讨冷缺血损伤与供胰细胞凋亡的关系及其相关机制。方法:1、30只健康小型猪随机配对,施行猪同种异体胰腺移植15次。将供胰的动、静脉与受体腹主动脉、下腔静脉吻合,静脉转流入体循环,十二指肠节段与受体空肠吻合,胰液空肠内引流。术中监测受体平均动脉压、中心静脉压。术后给予常规补液及抗凝、抗感染,观察记录受体一般情况,计算其存活率。2、将40只健康小型猪随机配对,施行猪同种异体胰腺移植20次。受体平均分为四组:1、冷缺血时间(CIT)0h组;2、冷缺血时间(CIT)3h组;3、冷缺血时间(CIT)6h组;4、冷缺血时间(CIT)9h组。切除受体猪胰腺制成糖尿病模型,胰腺移植完成30min后获取供胰组织标本,标本分三套,分别用作电镜观察、细胞凋亡原位末端标记检测及测定组织中HSP-70、TNF-α表达。此外,连续抽取静脉血,分别测定血糖、血淀粉酶及血清胰岛素浓度。结果:1、共完成全胰十二指肠移植15例,存活1d以上者14例,手术成功率为93%。供体平均手术时间(69.3±7.2)min,受体平均手术时间(75.5±13.1)min。15例受体中,1例因术中失血过多,于术后2h死于循环衰竭;另1例因感染引起肠-肠吻合口瘘于术后3d死亡;其余13例于手术后第2d获取外周血检测血糖均正常。2、四组供胰血流再通2h后受体猪血糖开始下降,24h后趋于稳定。于供胰移植成功后2h、8h,CIT 9h组血糖、血清淀粉酶均显著高于其余三组(P<0.05),且CIT 3h组和CIT 6h组显著高于CIT 0h组(P<0.05),而CIT 3h组和CIT 6h组之间则无显著差异(P>0.05)。3、供胰血流再通后0.5h时,TUNEL(TDT介导dUTP末端标记法)染色结果发现,各组供胰组织内均可见散在分布的胞核染色阳性的胰腺腺泡细胞,电镜观察也进一步证实了供胰再灌注期间组织内存在内质网扩张、线粒体轻度肿胀、胞核浓缩、异染色质增多的凋亡腺泡细胞,且低温保存时间越长的供胰,单位面积内阳性细胞数量越多。定量分析结果发现,四组供胰的凋亡指数(Apoptosis index, AI)间均具有显著差异(P<0.01)。此外,供胰血流再通后0.5h,四组供胰组织内均可见程度不等的TNF-α表达,阳性物质分布于细胞质。定量分析发现各组间TNF-α表达均具有显著差异(P<0.05或P<0.01),其表达程度依次为:CIT 0h组<CIT 3h组<CIT 6h组<CIT 9h组。此时,四组供胰组织内亦可见分布于细胞质和细胞膜的HSP-70阳性表达,其表达程度依次为:CIT 0h组>CIT 3h组>CIT 6h组>CIT 9h组,各组间HSP-70表达也具有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:1、采用供胰的动、静脉与受体腹主动脉、下腔静脉吻合,十二指肠节段与受体空肠吻合,建立猪的胰腺移植模型,该模型简单、稳定、可靠,克服了传统模型并发症多、死亡率高等缺点,因而不失为研究胰腺移植的较理想模型。2、胰腺移植过程中供胰的冷缺血损伤是移植后胰腺功能不全的重要原因之一。因此,若能减轻供胰的冷缺血损伤程度,对提高胰腺移植成功率可能具有至关重要的作用。3、作为细胞死亡的另一种形式—凋亡参与了供胰低温保存损伤过程,且随着冷缺血时间的延长,胰腺细胞凋亡程度加重。故此,临床上若能采取有效的抑制细胞凋亡措施,可能对减轻供胰的低温保存损伤、提高供胰的存活率具有重要的作用。4、TNF-α及HSP-70均参与了供胰冷缺血损伤过程,TNF-α可能与诱导细胞凋亡有关,而HSP-70可能抑制细胞凋亡。