【摘 要】
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背景与目的:慢性应激可促进焦虑水平增长,对肠道菌群及肠屏障产生影响,在多种胃肠道身心疾病的发生发展中起重要作用。咬合功能障碍（Occlusal disharmony,OD）作为一种慢性应激可使机体的下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA axis）对随后遭遇的应激敏感性增高,并且对处于慢性应激状态下的机体产生的焦虑情绪具有促进作用。因
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背景与目的:慢性应激可促进焦虑水平增长,对肠道菌群及肠屏障产生影响,在多种胃肠道身心疾病的发生发展中起重要作用。咬合功能障碍（Occlusal disharmony,OD）作为一种慢性应激可使机体的下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA axis）对随后遭遇的应激敏感性增高,并且对处于慢性应激状态下的机体产生的焦虑情绪具有促进作用。因此本实验研究通过建立OD以及慢性不可预测性温和应激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）两类应激源分开和交互作用的动物模型,以研究两者对大鼠肠道菌群影响,以及肠屏障中紧密连接（Tight junction,TJ）蛋白表达水平的变化情况,揭示OD以及OD大鼠遭遇CUMS刺激后肠道发生的变化,从而探究OD对肠道的影响机制。材料和方法:健康的4周龄Sprague-Dawley雄性大鼠24只,通过随机数表法将其分为对照组、OD组、CUMS组和OD+CUMS组,适应一周后,通过数字化导板,磨除涉及OD因素组（OD组和OD+CUMS组）的SD大鼠上颌磨牙,一侧磨除量为0.5mm,另一侧保持原有咬合面形态。适应2周后,对涉及CUMS因素组（CUMS组和OD+CUMS组）的大鼠施加慢性不可预估性应激,5周后取材进行后续实验。每周监测一次大鼠体重增长量,同时通过酶联免疫吸附实验检测第56天血清皮质酮水平和旷场实验评估大鼠行为表现,以分析各组大鼠焦虑水平;无菌条件下收集第56天各组大鼠粪便,通过16s RNA测序分析大鼠肠道粪便微生物的变化情况;通过蛋白免疫印迹法定量检测结肠组织中TJ蛋白,即胞质紧密粘连蛋白1（Zonula occluden-1,ZO-1）、连接黏附分子A（Junctional adhesion molecule-A,JAM-A）、封闭蛋白2（Claudin-2）表达情况,同时结合免疫荧光法对TJ蛋白进行进一步的分析。结果:（1）OD+CUMS组大鼠较对照组体重增长量、血清皮质酮水平以及旷场实验中的水平得分和垂直得分有显著的差异（P<0.05）。这表明两者交互作用时SD大鼠的焦虑水平明显升高。（2）OD和CUMS单独或交互作用均可导致肠道菌群多样性下降和相对丰度改变,交互作用时二者改变更明显,但无统计学意义。在菌群组成中相对于对照组,厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门都发生改变,而在属分类水平中,与短链脂肪酸生成相关的罗氏菌属、毛螺菌数以及瘤球菌属丰度均呈下降趋势;机会性致病菌链球菌属、肠球菌属及大肠杆菌志贺氏菌丰度上升。（3）相对于对照组,OD组、CUMS组和OD+CUMS组的结肠组织TJ蛋白ZO-1、JAM-A表达减少,Claudin-2表达增高,其中OD+CUMS组变化更为明显且具有统计学意义（P<0.05）,各组结肠组织的免疫荧光法分析结果趋势一致。结论:相对于对照组,OD大鼠在伴有或未伴有CUMS的情况下,在行为学表现、血清皮质酮水平、肠道菌群以及结肠TJ蛋白都存在差异,并且OD伴CUMS时,上述变化更为明显,提示OD的存在可能对肠道菌群和屏障的变化起促进作用。
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