一、研究目的痤疮是皮肤常见病、易发病,是人青春的伴生品,中医理论认为痤疮为肺、脾、胃三经有热,外感毒邪以致血热郁、滞肌肤,湿热上蒸皮肤而成。随着人类文明的进步,人们生活水平的提高,人们越来越注重功效性化妆品的品质,天然植物或中草药祛痘化妆品也越来越受到人们的亲睐。复方黄芩、黄柏、大黄、苦参(比例为1：1：1：1)临床验证有效。黄芩清热燥湿、泻火解毒,善清肺热；黄柏清热燥湿,善清下焦之热；苦参清热燥湿,为诸多皮肤顽症所用；大黄清热泻火、活血化瘀。四味药组方,有清热燥湿、泻火解毒之功。近年来中药化妆品产业发展较快,但是整个行业技术状况落后,包括处方、工艺、质量、功效,尤其是中药化妆品功效性成分提取分离工艺落后,所以本文采用先进技术,进行系统地研究,其处方药材有效成分得到最大保留,且产物色泽浅、澄明度高,同时对应用于化妆品领域的中草药复方功效性成分的提取分离提供示范。二、研究方法本研究首次采用响应曲面设计方法来优化复方的提取工艺参数。通过预实验及大量文献检索,证明对该处方有效成分的提取以乙醇作提取溶媒比水作溶媒能使复方有效成分保留率更高。本论文以乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)为考察因素,各因素下设定3个水平,采用HPLC法对有效成分—大黄素、大黄酚、黄芩苷、盐酸小檗碱的转移率进行测定,对考察因素的显著性和交互作用进行分析,对工艺参数的预测值进行实验验证,确定最佳提取工艺参数。本研究首次采用大孔树脂对此中药祛痘复方提取液的主要有效成分进行纯化。采用单因素实验优化纯化工艺参数。采用HPLC、TLC法测定并计算有效成分的转移率,应用静态吸附实验对D101、复方—JD、AB—8、HPD750四种型号大孔树脂进行筛选,采用动态洗脱实验考察洗脱溶剂乙醇的最佳洗脱浓度和用量。确定大孔树脂分离纯化复方有效成分的最佳工艺参数。三、研究结果本论文应用响应曲面实验设计方法建立了复方提取工艺数学模型,同时优选提取最佳工艺条件为：提取时间2.5小时、醇浓度75%、醇用量10倍量(设定提取两次,第二次提取采用75%乙醇,8倍量,提取1小时)。3批验证实验得功效成分大黄酚的平均转移率为：70.71%；大黄素平均转移率为：52.89%；黄芩苷平均转移率为：79.62%；盐酸小檗碱平均转移率为84.69%。与实验预测值相近,证明此模型可靠性高。最佳工艺条件下的提取液浓缩至无醇味,用以制备大孔树脂上样液,考虑到蒽醌类有效成分的水溶性差的性质,对浓缩液加入一定比例乙醇增大其溶解度,对含醇体积百分比进行考察,得上样液含醇20%时对有效成分的总体转移和吸附效果好。实验从D101、复方—JD、AB—8、HPD750四种型号树脂进行优选出D101树脂,D101大孔树脂对复方有效成分具有良好的吸附分离效果,同时具有经济特点。对洗脱溶剂乙醇,考察了55%、65%、70%、75%、85%、95%六个洗脱浓度,得65%对黄芩苷的洗脱效果好。但此洗脱浓度对大黄酚的洗脱效果极弱,薄层色谱检验未见大黄酚黄色荧光斑点。对大黄酚的洗脱效果随醇浓度的增加渐强。故先采用65%乙醇进行动态洗脱,再采用95%乙醇续洗脱。洗脱终点的判断通过薄层色谱确定,得黄芩苷用65%乙醇洗脱至10个柱体积时几乎无暗色斑点。65%洗脱液部分可见大黄素荧光斑点,先用65%洗脱10个柱体积,续用95%乙醇续洗脱,续洗脱至第3个树脂柱体积时大黄素斑点极弱。65%乙醇洗脱液中未检视出大黄酚斑点,95%续洗脱液可见大黄酚荧光斑点,先用65%洗脱10个柱体积,续用95%乙醇续洗脱,续洗脱至第6个柱体积时斑点极弱。盐酸小檗碱在65%、95%洗脱液中均有,先用65%洗脱10个柱体积,续用95%乙醇续洗脱,续洗脱至5个柱体积时几乎无荧光斑点。通过上述优化建立了中药祛痘复方乙醇提取—大孔树脂分离这一整套的工艺路线。四、结论响应曲面实验设计方法优选最佳提取工艺条件为：提取时间2.5小时、醇浓度75%、醇用量10倍量(设定提取两次,第二次提取采用75%乙醇,8倍量,提取1小时)。3批验证实验的实验值与预测值相近,说明此工艺条件可靠性高。大孔树脂纯化工艺,上样液含醇体积比为20%时对4种有效成分综合溶解性好,且经D101树脂纯化有效成分的保留率高。四种型号树脂选用D101树脂纯化性价比高,洗脱条件为先采用65%乙醇洗脱10个柱体积,再用95%乙醇洗脱6个柱体积。