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【目的】
1.探讨铁氧还蛋白还原酶(FDXR)及其过表达对原代培养人皮脂腺细胞增殖,分化和脂质生成的影响。
2.了解胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(proteinkinase,PKB;别名Akt)通路对皮脂腺细胞FDXR表达的影响。
3.观察FDXR在皮脂分泌异常皮损中表达。
【方法】
1.通过用重组FDXR过表达腺病毒(Ad-GFP-FDXR)感染原代培养人皮脂腺细胞,上调皮脂腺细胞中FDXR表达。
2.IGF-1和LY294002用作激活剂和抑制剂以研究FDXR在人原代皮脂腺细胞PI3K/Akt通路诱导脂质生成作用。
3.定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹(westernblot)检测FDXR,PPARγ,LXRα/β,SREBP1和Sox9的表达量;BrdUELISA法、MTS法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;油红O染色检测细胞皮脂分泌水平。
4.收集10例痤疮倾向患者皮损及正常对照皮肤,免疫组化、qRT-PCR检测FDXR表达。
【结果】
1.FDXR在人原代皮脂腺细胞正常分化模型中的表达变化:在皮脂腺细胞正常分化过程中,FDXR、PPARγ、LXRα/β、SREBP1和Sox9表达随之升高。
2.FDXR对人原代皮脂腺细胞分化、增殖、脂质生成及周期的影响:FDXR过表达增强皮脂腺细胞分化标志物PPARγ表达及脂质生成,并通过诱导G2/M期细胞周期阻滞来抑制皮脂腺细胞增殖。
3.IGF-1对人原代培养皮脂腺细胞中FDXR表达的影响:IGF-1刺激PI3K/Akt通路激活、FDXR表达和脂质生成,LY294002预处理可阻断这些作用。
4.异常皮脂分泌皮损中FDXR表达:免疫组化、qRT-PCR显示FDXR在异常皮脂分泌病变中表达高于正常皮肤组织。
【结论】
1.FDXR能促进皮脂腺细胞分化和脂质生成,并可通过G2/M期阻滞,抑制皮脂腺细胞增殖。
2.FDXR可用作皮脂腺细胞分化末期标记物。
3.IGF-1/PI3K/Akt/FDXR通路可能参与皮脂腺细胞的生化功能。
1.探讨铁氧还蛋白还原酶(FDXR)及其过表达对原代培养人皮脂腺细胞增殖,分化和脂质生成的影响。
2.了解胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(proteinkinase,PKB;别名Akt)通路对皮脂腺细胞FDXR表达的影响。
3.观察FDXR在皮脂分泌异常皮损中表达。
【方法】
1.通过用重组FDXR过表达腺病毒(Ad-GFP-FDXR)感染原代培养人皮脂腺细胞,上调皮脂腺细胞中FDXR表达。
2.IGF-1和LY294002用作激活剂和抑制剂以研究FDXR在人原代皮脂腺细胞PI3K/Akt通路诱导脂质生成作用。
3.定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹(westernblot)检测FDXR,PPARγ,LXRα/β,SREBP1和Sox9的表达量;BrdUELISA法、MTS法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;油红O染色检测细胞皮脂分泌水平。
4.收集10例痤疮倾向患者皮损及正常对照皮肤,免疫组化、qRT-PCR检测FDXR表达。
【结果】
1.FDXR在人原代皮脂腺细胞正常分化模型中的表达变化:在皮脂腺细胞正常分化过程中,FDXR、PPARγ、LXRα/β、SREBP1和Sox9表达随之升高。
2.FDXR对人原代皮脂腺细胞分化、增殖、脂质生成及周期的影响:FDXR过表达增强皮脂腺细胞分化标志物PPARγ表达及脂质生成,并通过诱导G2/M期细胞周期阻滞来抑制皮脂腺细胞增殖。
3.IGF-1对人原代培养皮脂腺细胞中FDXR表达的影响:IGF-1刺激PI3K/Akt通路激活、FDXR表达和脂质生成,LY294002预处理可阻断这些作用。
4.异常皮脂分泌皮损中FDXR表达:免疫组化、qRT-PCR显示FDXR在异常皮脂分泌病变中表达高于正常皮肤组织。
【结论】
1.FDXR能促进皮脂腺细胞分化和脂质生成,并可通过G2/M期阻滞,抑制皮脂腺细胞增殖。
2.FDXR可用作皮脂腺细胞分化末期标记物。
3.IGF-1/PI3K/Akt/FDXR通路可能参与皮脂腺细胞的生化功能。