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农药残留危害人体健康，因此对农药残留的检测逐渐成为研究的热点。ELISA方法是目前应用较普遍的检测手段，而抗体的制备是其中的关键部分。与传统的单抗和多抗相比，基因工程抗体具有多方面的优势。本研究以T7噬菌体为载体，分别构建了鼠源天然噬菌体抗体库和西维因免疫噬菌体抗体库，根据ELISA原理淘选西维因特异性单链抗体基因，并利用大肠杆菌进行基因工程抗体的重组表达，为西维因基因工程抗体在ELISA快速检测方法中的应用奠定了基础。
本研究首先采用非免疫的Balb/C小鼠，从其脾脏中提取1 mg的总RNA并纯化mRNA，以反转录的cDNA为模板，通过设计的兼并引物扩增轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，经过重叠延伸PCR方法连接为单链抗体基因(scFv)，EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后连接T7噬菌体载体臂并进行体外包装，成功构建了库容为1.74×107pfu的天然噬菌体抗体库，从中随机选取10个的噬菌斑进行重组基因的PCR验证，结果重组正确率达90％，在选取5个噬菌体测序，结果5个序列都不相同，说明构建的噬菌体抗体库质量高且多样性较好。将原始文库噬菌体侵染大肠杆菌BLT5403进行文库的液体扩增，利用ELISA方法从中筛选西维因特异性单链抗体，但无法富集到对西维因有亲和力的噬菌体展示抗体，说明虽然天然噬菌体抗体库针对目标抗原的特异性较低，因此构建西维因免疫噬菌体抗体库，以获得对西维因亲和力高的单链抗体。
本研究又以西维因人工抗原5H-KLH免疫Balb/C小鼠，提取免疫小鼠的脾脏总RNA，以同样的方法成功构建了库容为1.74×107pfu的西维因免疫噬菌体抗体库。以同样的方法从文库中筛选西维因特异性单链抗体，共淘选四轮，每轮西维因包被原的包被量依次为50，25，5，1μg/mL，每轮加入的噬菌体为109 pfu，每轮淘选后的滴度分别为1.08×105，2×104，3×106，3.2×106pfu/mL；从第四轮淘选的噬菌体中随机挑取58个单克隆噬菌斑，经PCR筛选获得19个正确重组的阳性克隆，利用直接ELISA进行西维因特异性筛选，选择特异性较好的两个克隆的基因连入表达载体pET26b，并转入BL21(DE3)进行IPTG诱导表达，产物经SDS-PAGE电泳检测，结果显示克隆A16-3成功表达了分子量为30kDa的蛋白，并在20℃、IPTG终浓度为0.1和0.05 mM的条件下可以表达出可溶性单链抗体。将获得的抗体纯化后利用直接ELISA的方法进行活性的初步测定，包被抗体1μg/孔，标品16μg/L的条件下，抑制率达到18％，说明获得的单链抗体对西维因有一定的亲和力和特异性。