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目的从蛋白组学和分子生物学方面检测NMDA受体NR2B亚基阻断剂Ifenprodil对关键期单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区NR2A和NR2B亚基相对表达量的影响,为弱视机制研究及药物靶向治疗提供实验基础。方法选取生后24天健康C57BL/6小鼠,雌雄不限。采用随机数字表法将小鼠随机分为正常0天组(N0),正常对照3天组(N3d),正常对照6天组(N6d),正常对照3天+Ifenprodil组(N3d+Ifenprodil),正常对照6天+Ifenprodil(N6d+Ifenprodil),单眼剥夺3天组(MD3d),单眼剥夺6天组(MD6d),单眼剥夺3天+Ifenprodil组(MD3d+Ifenprodil),单眼剥夺6天+Ifenprodil组(MD6d+Ifenprodil),每组5只,MD3d,MD6d组分别于生后24天缝合右眼,制备单眼形觉剥夺模型,与N组在同样环境下饲养,分别继续饲养3天、6天。3天组腹腔注药小鼠于第1,1.5天进行注药,6天组则于1,3,5天给药,给药剂量为10mg/kg。采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组小鼠视皮层NR2A和NR2B蛋白和m RNA的相对表达情况。结果Western blot结果显示:1.比较各组小鼠左右侧视皮层V1B区NR2A,NR2B蛋白相对表达量N0,N3d,N3d+Ifenprodil,N6d,N6d+Ifenprodil各组左右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量差异均无统计学意义(各组P>0.05);MD3d,MD3d+Ifenprodil,MD6d,MD6d+Ifenprodil各组左右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量有统计学差异(两组均为P<0.05)。N0,N3d,N3d+Ifenprodil,MD3d+Ifenprodil,N6d,N6d+Ifenprodil,MD6d+Ifenprodil各组左右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量差异无统计学意义(各组P>0.05);MD3d,MD6d两组左右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量有统计学差异(两组均为P<0.05)。2.发育关键期内正常饲养小鼠视皮层V1B区NR2A,NR2B蛋白相对表达量变化N0,N3d,N6d三组小鼠左侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);N0,N3d,N6d三组小鼠右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。N0,N3d,N6d三组小鼠左侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);N0,N3d,N6d三组小鼠右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.关键期内单眼形觉剥夺对正常小鼠初级视皮层V1B区NR2A,NR2B蛋白相对表达量的影响与N3d组相比,MD3d组小鼠左侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。与N3d组相比,MD3d组小鼠左侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。与N3d组相比,MD3d组小鼠右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。与N3d组相比,MD3d组小鼠右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。4.Ifenprodil对发育关键期内正常小鼠视皮层V1B区NR2A,NR2B蛋白相对表达量的影响N3d+Ifenprodil组与N3d组相比,N6d+Ifenprodil组与N6d组相比小鼠左侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量差异无统计学意义(两组均为P>0.05).N3d+Ifenprodil组与N3d组相比,N6d+Ifenprodil组与N6d组相比小鼠右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。N3d+Ifenprodil组小鼠左侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量较N3d组小鼠左侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量低,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。N3d+Ifenprodil组小鼠右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量较N3d组小鼠右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量低,差异有统计学意义(P<0.05),6天组与3天组结果一致,差异前者较后者明显(P<0.05)。5.Ifenprodil对发育关键期内单眼形觉剥夺小鼠视皮层V1B区NR2A,NR2B蛋白相对表达量的影响MD3d组与MD3d+Ifenprodil组相比,MD6d组与MD6d+Ifenprodil组相比小鼠左侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。MD3d组与MD3d+Ifenprodil组相比,MD6d组与MD6d+Ifenprodil组相比小鼠右侧视皮层V1B区NR2A蛋白相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。N3d+Ifenprodil组与MD3d+Ifenprodil组相比,N6d+Ifenprodil组与MD6d+Ifenprodil组相比小鼠左侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量差异无统计学意义(两组均为P>0.05)。N3d+Ifenprodil组与MD3d+Ifenprodil组相比,N6d+Ifenprodil组与MD6d+Ifenprodil组相比小鼠右侧视皮层V1B区NR2B蛋白相对表达量差异无统计学意义(两组均为P>0.05)。荧光实时定量PCR结果与western blot结果一致。结论1.正常小鼠初级视皮层NMDA受体亚基NR2A伴随发育表达逐步增加,NR2B表达减少。2.视觉发育关键期内单眼形觉剥夺可降低NR2A亚基表达,同时单眼剥夺使NR2B亚基表达增加。3.NR2B受体阻断剂Ifenprodil可以通过血脑屏障选择性阻断V1B区NR2B受体的表达,并阻断单眼形觉剥夺对NR2B蛋白表达的影响,这为探索弱视机制提供了一定的研究基础,开拓了药物靶向治疗弱视的新思路。