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目的:本实验用TUNEL法、电泳法及免疫组织化学等技术观察在体大鼠肢体缺血再灌注后肾脏、肺脏损伤发生过程中,细胞凋亡以及Bcl-2、caspase-3蛋白质表达的变化,采血取上清检测血肌酐、尿素氮水平,并探讨临床麻醉常用药物丙泊酚、咪唑安定的干预效应及机制,为其在临床应用中提供一定的实验支持。方法:健康雄性SD大鼠,10%的乌拉坦(1.0 g·kg-1)腹腔注射麻醉,随机分为6组:①对照组或假手术组(sham组,n=6),只进行麻醉并解剖股血管及股神经,不做其它处理。②肢体缺血1小时再灌注4小时组(I1h组,n=6)。③肢体缺血3小时再灌注4小时组(I3h组,n=6)。④肢体缺血3小时再灌注4小时+丙泊酚组(Pro组,n=6)。⑤肢体缺血3小时再灌注4小时+咪唑安定组(Mizo组,n=6)。⑥肢体缺血3小时再灌注4小时+10%的脂肪乳组(Intr组,n=6)。缺血前10分钟静脉注射丙泊酚(生理盐水稀释至0.5%)5mg·kg-1,然后以10 mg·kg-1·h-1持续输注至实验结束;咪唑安定(生理盐水稀释至0.05%)0.5mg·kg-1,然后以0.2mg·kg-1·h-1持续输注至实验结束;Intr组给予等量的10%的脂肪乳(生理盐水稀释至5%);I1h组和I3h组给予生理盐水。实验结束,颈动脉放血处死大鼠,同时留取血液,离心取上清-20℃冰箱保存测血肌苷和尿素氮值;分别取肺组织及肾组织采用TUNEL法观察细胞凋亡的发生情况;免疫组织化学观察Bcl-2、caspase-3蛋白质表达情况;并提取组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察其变化。结果:①肾功能即血肌酐,尿素氮结果:各组测量结果均在正常值范围。②TUNEL结果:sham组几乎未见凋亡细胞。比较凋亡指数(AI):其它各组与sham组比较均有统计学意义(P<0.01);I1h组与I3h组比较差别有显著性(P<0.05);Mizo组与I3h组比较差别有显著性(P<0.01);Pro组与Intr组比较有统计学意义(P<0.01);Mizo组凋亡指数虽比Pro组高,但两组比较差别无显著性(P>0.05);Intr组与I3h组比较差别无显著性(P>0.05)。③组织中Bcl-2、caspase-3的表达:免疫组织化学切片以平均光度、阳性单位为指标进行半定量分析。Bcl-2、caspase-3在对照组表达较低,相关性分析caspase-3表达阳性单位与AI呈正相关。Bcl-2表达平均光度、阳性单位半定量分析:其它组与sham组比较均有统计学意义(P<0.01);I1h组与I3h组比较差别有显著性(P<0.01);Mizo组与I3h组比较差别有显著性(P<0.01);Pro组与Intr组比较有统计学意义(P<0.01);Mizo组与Pro组两组比较差别无显著性(P>0.01);Intr组与I3h组比较差别无显著性(P>0.05)。caspase-3表达平均光度、阳性单位半定量分析比较结果与Bcl-2相同。④组织电泳结果:sham组肾脏肺脏几乎未见梯形条带,I1h组肾脏和I3h组肺脏凋亡发生较明显,而其余各组均隐约可见凋亡较典型的条带,实验重复结果相似。