提高动物繁殖力一直是生殖生物学研究的目标，也是畜牧业中必须解决的关键性问题，类固醇激素合成能力的强弱是影响繁殖力的一个重要因素。近半个世纪以来，类固醇激素生物合成的调节机制一直是内分泌研究的热点。以往通过体内或体外研究方法，比较详细地研究了促性腺激素对类固醇合成的慢反应调节，为全面认识类固醇合成的调节机制奠定了基础。近年来的研究表明，类固醇合成的快速调节机制对于调节动物的生殖活动有着十分重要的意义，猪作为我国最有优势的畜群种类，在世界畜牧产业的发展中具有举足轻重的作用。为了充分发挥我国猪种特有的繁殖优势，本研究以仔猪为实验材料，研究仔猪睾酮合成快速调节机制。 大量的研究表明，类固醇合成快速调节蛋白(STAR)是调节类固醇合成的限速因子，因此，我们首先研究了StAR蛋白在仔猪睾丸中的表达。以1～5周龄的仔猪睾丸为研究对象，采用免疫组化法和放射免疫法(RIA)研究了StAR蛋白在仔猪睾丸的表达及StAR蛋白与血浆睾酮水平的关系。实验结果表明：在1～5周龄，StAR蛋白主要在仔猪睾丸的间质细胞中表达；其中1周龄、3周龄StAR蛋白的表达水平较低；2、4周龄StAR蛋白的表达水平较高，5周龄StAR蛋白的表达水平低于2、4周龄，但比1、3周龄高。睾酮水平在第2、3周时最高，在其它时期较低。StAR的表达与睾酮水平的变化并不完全一致。 以上研究未能揭示睾酮分泌与StAR蛋白表达之间的相互关系，这可能是因为未能排除其它细胞的干扰，因此，我们拟用体外培养的间质细胞进行研究。目前有人认为，原代培养细胞在体外培养的条件下随着培养时间的延长，其反应性将下降，为了找到一个适宜的反应体系，我们对体外培养间质细胞的反应性进行了研究。用酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞，将获得的间质细胞进行体外培养，结果发现随着培养时间的延长，间质细胞的功能逐渐降低，对hCG刺激反应以培养d1和d2最大，随着培养时间的延长，间质细胞的反应性下降，d4与对照无明显差异(P＞0.05)：小剂量hCG(50IU／ml)可使睾酮分泌达到峰值，加大剂量则会抑制细胞分泌睾酮的功能。hCG(50IU／ml)对间质细胞的刺激作用在0～24h内，随着刺激时间的延长，分泌能力加强。这表明为了模拟体内的环境，培养时间以1～2d为宜，由于我们的目标集中在快速调节期，因此，我们将刺激时间定为2h。 百南农业大学俘日卜毕业论文性蛋白随hCG刺激时间的延长逐渐升高(0一Zh);(3)8一Br一cAMP处理后，StAR蛋白、mRNA和ERKI几活性的浓度随刺激时间的延长逐渐升高(O一2h);(5功口入MAPK的抑制剂PD98059，StAR蛋白、mRNA的水平逐渐降低;(6)加入PKI，StAR蛋白、mRNA和ERKI/2活性明显下降。因此，我们认为hCG在诱导StAR蛋白的表达过程中，主要通过以下信号途径传递信息:(l)通过cAMP一 PKA直接调节StAR蛋白由前体蛋白向成熟蛋白的转化:(2)通过cAMP一PKA，激活ERK级联，ERK级联再激活转录因子，促进StAR基因的表达。 综上所述，我们可以得到如下结论: 1、StAR蛋白在1一5周龄均有表达，其变化趋势与血浆中皋酮水平不完全一致。 2、随着培养时间的延长，间质细胞的功能逐渐降低，对hCG刺激的反应以培养dl和dZ最大。随着培养时间的延长，间质细胞的反应性下降，d4与对照无明显差异(P>0.05).小剂量hCG(50Iu/ml)可使皋酮分泌达到峰值，加大剂量则会抑制细胞分泌翠酮的功能。hCG(50IU/ml)对间质细胞的刺激作用在0~24h内，随着刺激时间的延长，分泌能力加强。 3、辜酮(somg/ml)可通过降低间质细胞的反应性，抑制StAR蛋白基因的表达。 4、FSH对间质细胞的功能没有直接影响，但可作用于支持细胞调节StAR蛋白的表达。 5、在O一Zh内，hCG主要通过促进StAR蛋白的表达，增加翠酮的合成. 6、hCG在诱导StAR蛋白的表达过程中，主要通过以下信号途径传递信息:(1)通过cAMP一PKA直接调节StAR蛋白由前体蛋白向成熟蛋白的转化;(2)通过cAMp一PKA，激活ERK级联，ERK级联激活转录因子，促进StAR基因的表达.