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氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种高效的广谱抗生素,通过阻碍细菌蛋白质的合成来抑制细菌的繁殖和生长。由于其价格便宜,抗菌性强,曾在动物养殖和水产养殖中广泛使用。然而,研究发现CAP易在人体内积累,而且具有强烈的副作用和毒性。目前,我国及欧盟等国家已禁止将氯霉素添加到动物及鱼饲料中。但在经济利益的驱使下,动物及水产养殖过程中违法使用氯霉素的现象仍时有发生。二甲基异茨醇(2-methylisoborneol,MIB)是一种土腥味物质,易在鱼、虾等水产品体内富集,严重影响水产品的食用口感和品质,造成较大的经济损失。为了保证动物性食品安全及提高水产品品质,迫切需要建立测定动物饲料、动物性食品中氯霉素及水产品中二甲基异茨醇的高灵敏度、高选择性的分析方法。本文的第一部分是运用杂交瘤抗体制备技术,制备针对氯霉素的单克隆抗体(mAb),并以所制备的mAb为基础,建立测定氯霉素的灵敏度高、特异性强的酶联免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。首先制备了三种免疫原并用于免疫小鼠。选择高滴度的小鼠的脾细胞进行细胞融合。然后通过对杂交瘤细胞的培养和筛选,成功地筛选出两株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(1B1和2D2)。在最佳条件下,基于氯霉素mAb(2D2)的ELISA的半抑制浓度(IC50)和检出限(LOD)值分别为0.46 ng mL-1和0.06 ng mL-1。所建立的ELISA与其他抗生素(氟苯尼考、甲砜霉素等)无交叉反应(CR<0.01)。在实际样品检测时,将不同浓度的氯霉素添加到虾、饲料和牛奶样品中,经过提取和稀释后用ELISA检测。结果显示,虾、饲料和牛奶样品中氯霉素回收率和变异系数(CV)分别为80.6-116.0%和5.5-15.4%(n=3),96.2-111.0%和 7.0-13.5%(n=3)和 79.7-109.8%和 5.8-13.3%(n=3)。另外,加标样品用固相萃取方法(solid phase extraction,SPE)进行样品预处理,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测。虽然ELISA(检测结果以回收率表示)与LC-MS/MS-SPE具有良好的相关性,但LC-MS/MS-SPE的检测结果明显低于ELISA的检测结果,究其原因是SPE萃取效率较低。为此,我们通过共价偶联将氯霉素mAb固定在CNBr活化的Sepharose-4B凝胶表面上,建立了用于氯霉素加标样品前处理的免疫亲和净化(immunoaffinityclean-up,IAC)技术。在优化的条件下,将mAb固定的凝胶与加标样品的提取液混合充分,即可提取和净化目标物。IAC技术不仅方法操作简便,而且萃取效率明显提高。加标样品通过LC-MS/MS-IAC测定时,氯霉素的回收率为 78.6-106.7%,且 CV 小于 11.1%(n=3)。本文的第二部分是以MIB结构的类似物一樟脑为起始物,经过化学修饰后,合成MIB的免疫原并制备单克隆抗体。MIB的结构中只有一个活性基团—羟基,且纯品价格昂贵,而樟脑便宜易得。通过将樟脑与烯丙基溴的格氏试剂反应,在樟脑分子结构中引入烯丙基:接着氧化双键,成功合成了与MIB结构高度相似的衍生物。采用活化酯法将衍生物活化后与载体蛋白相连,制备出MIB的免疫原和包被抗原。最后,运用杂交瘤抗体制备技术成功筛选出两株杂交瘤细胞(3A4和6C2),并即将制备出针对MIB的单克隆抗体mAb。