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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是分布于我国沿岸的重要经济鱼类,它生长快,个体大,且味道鲜美,是目前海产养殖鱼类中单价最高的种类。半滑舌鳎雌性个体很大,但雄性个体很小,雌性比雄性生长速度快2-4倍,雄性个体成熟后也达不到商品规格,且雄性比例占大多数,所以,雄性个体不得不在养殖途中淘汰,给养殖者造成严重经济损失。近年,这一问题已经成为影响产业发展的重大渔业问题,而引起主管部门和科技工作者的普遍关注。本实验的目的是通过雌核发育诱导的方法生产全雌群体。诱导鱼类雌核发育是实现鱼类雌性化及研究性别决定机制的有效方法,迄今,已有多种鱼类进行了这方面的试验研究。现已知最常见的鱼类性别决定机制为XX-XY型和ZW-ZZ型。同样经雌核发育诱导后XX-XY型鱼类可得到全雌群体,而ZW-ZZ型鱼类雌雄个体各一半,正因为此了解半滑舌鳎的性别决定机制十分必要。同时如果半滑舌鳎是ZW-ZZ型性别决定机制,理论上来说诱导雌核发育后将会有WW型超雌鱼的出现,而超雌鱼能否存活,能发育到什么时期,有什么特征,都将是鱼类遗传和性别决定机制方面的重大突破。也将为以后的研究提供基础。通过实验证明WW型“超雌鱼”能在囊胚期检测到却不能在肌节期检测到,进而推测出WW型“超雌鱼”在原肠期全部死亡的结论。这也就导致了不能通过诱导雌核发育的方法生产全雌群体。因此在生产中迫切需要半滑舌鳎良种的基础上,本文开展了微卫星标记辅助育种的研究。标记辅助选择育种(Marker-assisted selection,MAS)是在DNA水平上进行选择,可以大大提高选择的准确性,也是近年广泛利用的选育方法。本研究采用冷冻鲈鱼精液成功诱导半滑舌鳎雌核发育；用微卫星标记及染色体制片方法检测雌核发育后代的性别及比例；根据半滑舌鳎遗传连锁图谱设计引物,筛选与生长性状相关的微卫星标记。取得以下重要结果：1、利用冷冻鲈鱼精液激活半滑舌鳎卵子,采用冷休克和静水压方法,成功诱导半滑舌鳎雌核发育,培育出减数分裂雌核发育个体,诱导出有丝分裂雌核发育胚胎。冷休克的最佳诱导条件为：起始时间(受精后)5min,持续时间25min,冷休克温度5℃。静水压的最佳诱导条件是：起始时间21.5min,持续时间4min,静水压力60MPa。2、利用性别特异性分子标记Cyse-SSR1检测雌核发育后代性别类型及性比,发现WW型胚胎仅出现于有丝分裂和减数分裂雌核发育的囊胚期,在而肌节期以后两种雌核发育都没有出现WW型胚胎,初步推断WW型“超雌鱼”个体在原肠期死亡。3、利用染色体核型检测雌核发育后代性别类型及性比。在半滑舌鳎的减数分裂和有丝分裂雌核发育组中均未发现有两条性别特异性染色体的WW型“超雌鱼”,也未发现有一条性别特异性染色体的ZW型雌性,而是全部为没有性别特异性染色体的ZZ型雄性。在对照组中未发现WW型“超雌鱼”,ZW型雌性与ZZ型雄性的比例接近1：1。从雌核发育后代的性比可以看出,半滑舌鳎雌核发育二倍体不是全雌性后代,因此可以判断,它不是雄性异配型性别决定机制,即非XX-XY型；雌核发育二倍体中未发现性别特异性大染色体,而是全部没有特异性染色体的ZZ型雄鱼,说明半滑舌鳎是一种特殊的雌性异配的性别决定机制。4、随机采集大小已分化半滑舌鳎200尾根据体重分为极端大群体和极端小群体。从卡方检验分析结果可以看出,在所选择的84个微卫星位点中,有12个微卫星位点的基因型分布,在极端大个体组和极端小个体组的差异趋近于显著(P<0.05),其中csou34、ghrh-ssr、hncyse160差异极显著(P<0.01), cs7、csou4、cyse22、cyse72、cyse123、sox9-1、hncse67、hncyse124、 hncyse129差异显著(P＜0.05)。5、利用微卫星标记Cyse-SSRI、SCAR标记CseF382将验证群体分为45尾的雌性群体和51尾的雄性群体。利用最小二乘法对微卫星位点与半滑舌鳎全长、体高、体重性状进行关联性分析。在雌性群体中：微卫星位点csou4、cyse123、ghrh-ssr与全长显著相关(P<0.05),cyse72、 hncyse160与全长极显著相关(P<0.01)；位点ghrh-ssr与体高显著相关(P<0.05);位点csou4、 ghrh-ssr与体重显著相关,cyse72、hncyse160与体重极显著相关(P<0.01)。在雄性群体中：位点hncyse129、hncyse160、sox9-1与全长显著相关：位点csou34、cyse22、cyse123、hncse67、 sox9-1与体高显著相关；未发现与体重显著或极显著相关的微卫星位点。6、对差异显著的位点进行不同基因型与生长性状的多重比较结果显示,在雌性群体中,全长、体高、体重性状的优势基因型为cs7位点的AA、csou4的AE、csou34的AA、cyse22的EF、cyse72的BC、cyse123的AB、hncse67的BC、hncyse124的AC、hncyse129的CC、 hncyse160的BB、ghrh-ssr的AE和sox9-1的AD。雄性群体内3个生长性状的优势基因型为cs7的AA、csou4的AC、csou34的EE、cyse22的CD、cyse72的BD、cyse123的AA、hncse67的AC、hncyse124的BC、hncyse129的CF、hncyse160的BB、ghrh-ssr的AC和sox9-1的AB。本研究首次提出并验证WW型“超雌鱼”个体在原肠期死亡的结论,优化减数分裂及有丝分裂雌核发育参数,首次筛选出与体重生长显著或极显著相关的12个微卫星位点,在雌雄群体内分别筛选出与全长、体高、体重性状相关的优势基因型。