【摘 要】
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目的:本文旨在探究HIF-1α与自噬在蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞光损伤中的作用,及两者间可能存在的作用关系,为深入研究年龄相关性黄斑变性病理机制及防治视网膜光损伤类疾病提供新思路和理论依据。方法:构建光强度（2000±500）Lux的LED蓝光模型,对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞株）进行2h、4h、6h、8h照射,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞增殖
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目的:本文旨在探究HIF-1α与自噬在蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞光损伤中的作用,及两者间可能存在的作用关系,为深入研究年龄相关性黄斑变性病理机制及防治视网膜光损伤类疾病提供新思路和理论依据。方法:构建光强度（2000±500）Lux的LED蓝光模型,对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞株）进行2h、4h、6h、8h照射,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞增殖活力改变,western blot及qPCR法检测自噬标志物及HIF-1α表达的变化;选取蓝光照射8h这一时间点,使用Rapa及3-MA干预自噬水平,CCK-8法检测细胞增殖活力,应用YC-1干预HIF-1α的表达,CCK-8法检测细胞增殖活力,western blot法检测HIF-1α/BNIP3通路蛋白及自噬相关蛋白的改变。结果:1.蓝光对ARPE-19细胞形态及增值活力的影响:蓝光照射4h后细胞形态发生改变,细胞变小、变圆,细胞周围见透亮圈,胞质见空泡,胞核皱缩;与无光照组比,各蓝光组细胞增殖活力均显著降低,光损伤具有时间依赖性,但随光照时间延长损伤加重的速度减慢（P<0.05）;2.蓝光对ARPE-19细胞自噬水平及HIF-1α表达的影响:western blot及qPCR结果显示与无光照组相比,各蓝光组Beclin-1、LC3II/LC3I表达显著增加,p62表达显著降低,HIF-1α表达显著增加,且表达量随光照时间延长而增加,蓝光8h时最大（P<0.05）;3.蓝光下干预自噬对ARPE-19细胞增殖活力的影响:与对照组相比,自噬抑制剂3-MA可显著降低ARPE-19细胞的增殖活力,自噬激活剂Rapa可显著提高ARPE-19细胞的增殖活力（P<0.05）;4.蓝光下干预HIF-1α对ARPE-19细胞增殖活力的影响:蓝光下抑制剂YC-1可显著降低ARPE-19细胞的增殖活力,且随YC-1浓度增加细胞增殖活力下降（P<0.05）;5.蓝光下干预HIF-1α对ARPE-19细胞HIF-1α/BNIP3通路蛋白及自噬相关蛋白的影响:与对照组相比,YC-1组HIF-1α、BNIP3、自噬标志蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1表达显著减少、p62表达显著增加（P<0.05）。结论:1.蓝光能够诱导体外培养的ARPE-19细胞损伤,损伤具有时间累积性,但损伤加重的速度减慢。2.蓝光能够诱导体外培养的ARPE-19细胞自噬过程的激活,且自噬对蓝光暴露后细胞的损伤具有保护作用,能一定程度阻止损伤的进一步加重。3.蓝光照射能够诱导体外培养的ARPE-19细胞HIF-1α的表达,且可能通过HIF-1α/BNIP3途径参与蓝光诱导的ARPE-19细胞自噬过程的调控。
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