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无核葡萄是世界范围内主要的葡萄育种目标之一。现有的无核葡萄品种多属于欧亚种群(Vitis vinifera L.),抗逆性普遍较差,市场上急需培育出抗逆、大粒及符合各种消费和农艺生产要求的优质无核葡萄新品种。传统的无核葡萄育种方法,由于无核品种的合子胚在发育进程中发生败育,只能以有核品种做母本获得有发芽力的杂交种子,而以无核品种作父本来传递无核性状,但用这种有核×无核杂交方式获得的无核后代较少,育种效率很低。利用胚挽救技术,可以用无核×无核的杂交方法来有效的提高杂交后代的无核比率。同时在杂交培育三倍体无核葡萄品种时,胚挽救技术有助于克服二倍体和四倍体之间杂交胚珠的败育。为了增强无核葡萄的抗逆性,充分利用原产我国的野生葡萄抗病和抗寒资源,用无核葡萄和中国野生葡萄进行杂交;同时为培育三倍体大粒无核葡萄品种,用二倍体和四倍体品种之间进行杂交,借助胚挽救技术获得杂交后代新种质,是选育抗逆、大粒、优质的无核葡萄新品系的有效途径。本研究主要以欧亚种(Vitis vinifera L.)无核葡萄品种‘无核白’、火焰无核、底来特、黎明无核、红宝石无核、森田尼无核、无核紫、皇家秋天等9个品种和欧蘡杂种00-3-1([爱莫无核×蘡薁(V. thunbergii Sieb.et Zucc.)])为母本,与中国野生刺葡萄(V. davidii Foex.)塘尾和雪峰、山葡萄(V. amurensis Rupr.)双优及欧山杂种(V. vinifera×V. amurensis)北醇,无核品种火焰无核、森田尼无核、皇家秋天、奥兰多无核,欧亚种有核葡萄品种红地球、新葡一号、新郁、紫霞、里扎马特进行杂交,以及二倍体欧亚种底来特、黎明无核、森田尼无核、新郁与四倍体欧美杂种(V. vinifera×V. labrusca)品种巨峰、藤稔、紫珍香、高妻之间进行杂交,共计32个杂交组合,运用胚挽救技术创建无核葡萄新种质;同时以优无核、奇妙无核、奥迪亚无核及以上无核葡萄品种和组合为试材,在前期试验的基础上,对葡萄胚挽救育种技术加以改进完善,主要获得了以下结果:1.通过无核葡萄胚挽救技术获得了葡萄田间杂交32个组合的葡萄新种质1337份。其中无核葡萄×中国野生葡萄或欧山杂种杂交组合6个,获得杂交植株153个;无核葡萄×无核葡萄杂交组合6个,获得杂交植株401个;无核葡萄×有核葡萄杂交组合9个,获得杂交植株353个;二倍体×四倍体组合7个,四倍体×二倍体组合4个,共获得杂交植株430个。分批次对这些杂交苗进行炼苗移栽,已有509个株系在大田移栽成活。2.对以无核白和火焰无核作亲本的191个杂交株系用无核探针GSLP1进行检测,有77个株扩增出569bp特异带,占40.3%。对火焰无核×塘尾杂交组合后代84个株系用抗黑痘病RAPD标记S183-1354进行检测,有41个株系扩增出1354bp特异带,占48.8%。综合两种标记的检测结果,获得同时能扩增出与无核和抗黑痘病分子标记的24个株系。3.用倍性分析仪对二倍体和四倍体之间的12个杂交组合409个后代株系进行倍性鉴定,得到8个三倍体杂种株系。用胚挽救获得的成苗率明显高于成熟种子播种萌发成苗率;以2x×4x的杂交方式,比4x×2x,能得到更多的杂交后代;但4x×2x的杂交后代中三倍体的获得比率高于2x×4x。?4.对10个无核葡萄品种的胚挽救难易程度和适宜取样接种时期进行了试验评价。以相同果粒中获得的最多发育胚数和萌发胚数为评价标准,各品种胚挽救从易到难的顺序为:奥迪亚无核、奇妙无核、火焰无核、优无核、无核紫、皇家秋天、底来特、黎明无核、无核白、森田尼无核;其适宜的取样接种时期分别为:花后40d、60d、40d、50d、70d、70d、60d、55d、35d、40d。5.在前期研究的基础上,对无核葡萄胚挽救过程各个培养阶段的适宜培养条件进一步完善确定,认为:在胚珠发育阶段,以MM3和Nitsch+GA30.5 mg l-1+IAA1.5 mg l-1作胚珠发育培养基,其次是ER培养基;在常温下进行固液双相暗培养,有助于提高胚发育率;在胚萌发阶段,使用WPM + BA 0.2 mg l-1培养基,添加2~5 mM腐胺有利于提高无核葡萄的幼胚萌发率,胚的萌发率与胚的大小相关;在萌发成苗阶段,胚萌发形成正常苗的比率与其母本胚的发育程度有关,白化苗的发生主要与母本基因型有关,畸形苗在MS + BA 2.0 mg l-1 + IBA 0.5 mg l-1中易于诱导形成正常茎叶,之后接种在生根培养基1/2 MS + IBA 0.2 mg l-1上可形成正常完整小植株;在胚挽救苗的炼苗移栽阶段,宜选择30d苗龄的壮苗,对基质用高压灭菌及无菌水浇透,每周浇1/4 B5培养基大量元素溶液有利于胚挽救苗的成活生长。6.为提高胚珠败育较早的无核葡萄品种火焰无核、无核白、森田尼无核的胚挽救成苗率,试验确定了针对不同品种外施植物生长调节剂的适宜的药剂种类浓度和施用时期:森田尼无核为花前14d施用100 ~ 500 mg l-1的矮壮素;无核白为花前10d施用500 mg l-1矮壮素;火焰无核为花前20d施用30 mg l-1的BA。