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前言 皮肤恶性黑色素瘤恶性度高，预后差，生物学行为受多种因素影响。淋巴结状态是决定恶性黑色素瘤预后的最重要因素，而肿瘤厚度与淋巴结转移率相关，关于是否做选择性区域淋巴结清扫术意见不一，以分子指标作为判定标准的研究很少，国内尚未见报道。细胞粘附分子CD44是一种广泛存在于细胞表面的跨膜糖蛋白，参与细胞-细胞，细胞-基质之间的特异性粘连，并能介导淋巴细胞“归巢”，其变异体与恶性肿瘤转移关系密切。Ki-67是存在于恶性和正常增殖细胞核内的一种非组织蛋白，由分子量为395Kd和345Kd的二条多肽链组成，为细胞增生相关抗原，在细胞增殖期时表达，在静止期时不表达，是判定肿瘤预后的参考指标。我们采用免疫组化法检测了70例皮肤恶性黑色素瘤细胞中的CD44V5和Ki-67的表达，分析CD44V5、Ki-67与临床病理特征的关系，以探讨CD44V5和Ki-67的表达在皮肤恶性黑色素瘤发生、发展及淋巴结转移中的作用。 实验材料 收集1990年1月至2001年2月辽宁省肿瘤医院治疗的70例皮肤恶性黑色素瘤石蜡标本，其中皮肤原发肿瘤标本55例，转移淋巴结标本34例，既有原发灶又有其淋巴结转移灶标本19例，正常对照标本12例。70例患者中男性45例，女性25例，平均年龄为50岁（17-83岁）；发病部位：四肢59例，颈部2例，躯干7例，原发灶不详者2例。请两位病理医生复查原病理切片，其中无色素恶黑2例，其余均为有色素恶性黑色素瘤。ZNM分期依据1988年美国癌症联合委员会制定的标准J依肿瘤厚度或浸润深度分为四级；N卜36例，N；上：34例；M外60例，M；：10例；I期：2例，H期：11例，皿期：47例＊期＊ 例。肿瘤厚度依据目镜测微器直接测量，分为五级：I级：＜0．75。：2例，11级0．76叫．50mm：4例，皿级互．51－3．00mrn：12例J级 3．01－4．50nun：12例，V级＞4．smm：25例。Qark分级依据肿瘤浸润深度也分为五级：I级(表皮人0例，H级(真皮乳头层人5例，皿级(浅真皮网状层卜 16例＊级(深真皮网状层卜 16例，V级(皮下脂肪层卜 18例。 试剂：免疫组化染色采用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连接法u－P法入一抗：CD。V。鼠抗人单克隆抗体，Ki－67鼠抗人单克隆抗体，抗原修复剂，SP试剂盒。 实验方法 S－P兔疫组化染色：每例切取sum切片二张，经二甲苯脱蜡、水化后进行常规S－P染色。采用半定量方法光镜下分析，先对整个切片测览，然后选择靠近正常组织边缘的视野，数200个肿瘤细胞迸行评估。根据阳性细胞数的百分率分为4个等级：0分：无阳性细胞；二分：阳性细胞＜30阮；2分：阳性细胞30畅－70助；3分：阳性细胞＞70畅。按染色强度将其分为4个等级：0分：无阳性细胞；二分：阳性细胞染色呈浅黄色；2分：阳性细胞染色呈黄色；3分：阳性细胞染色呈棕黄色。阳性细胞数评分与染色强度评分相加后除以2得出综合评分。因恶性黑色素瘤细胞中含有黑色素颗粒，整个颜色均偏深，故以0＊．9分为(刁，2－2．9为（＋人＞3为（＋＋）标准进行评估。统计方法：采用SPSS10．0统计软件包进行统计学处理。应用的统计方法包括以’检验，Kendall＼计数 ·2·资料相关系数r，Fisher＼确切概率P计算。 实验结果 CD。V。和hi－67在恶性黑色素瘤细胞中普遍表达，在正常细胞中不表达或弱表达。CD。V。和o－67在恶性黑色素瘤原发肿瘤细胞及其转移淋巴结肿瘤细胞中的表达差异无统计学意义汀＝0．50，P习．00入故对15例无原发肿瘤标本的病例以其转移淋巴结 CD。V。和 hi－67的表达结果代替，并与皮肤恶性黑色素瘤生物学特征做相关性分析。 一人D。V。在肿瘤细胞胞膜及胞浆中表达，但胞膜表达强于胞浆，以胞膜着色为判定标准。 二．CD。V。与恶性黑色素瘤浸润深度的关系 肿瘤厚度I－皿级阳性表达率为83．33％，IV－V级阳性表达率为 83．78％，H者差异无统计学意义h＞0．05入在 Clark分级中 I－皿级阳性表达率为 94．74％，IV－V级中阳性表达率为 82．35％，H者差异也无统计学意义仲＞0．05人 人CD。V。与恶性黑色素瘤pNM分期的关系 PITNM分期中 I－11期阳性表达率为 69．23％，皿－IV期阳性表达率为 94．74％，其差异有统计学意义计＝0．01人而且 CD。VS的表达量与 SM的表达量呈正相关，统计学有意义h＜0．05人 CD。V。与原发肿瘤分级无相关性k＞0·05）与转移淋巴结表达量呈正相关卜二 0．29，p＝0．01入水。阳性表达率为 75．00％，N；阳性表达率为 97．06％，二者差异有统计学意义帅＝0．01人与血行转移无相关性帅＜0．05人 二、m－67在皮肤恶性黑色素瘤细胞胞核中表达 1．hi－67表达与恶性黑色素瘤浸润深度的关系 肿瘤厚度 I－皿级的阳性表达率为 88．89％，IV－V级的阳 ·3·性表达率为 86．49％，其差异无统计学意义h＞0．05人 Clark分级中