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MicroRNA (miRNA)是一类在生物体内普遍存在的长度约22nt的内源性非编码小分子RNA。近年的研究表明,miRNA在植物与病原物互作过程中起着重要的调节作用。当病原物侵染番茄时,常造成严重的病害,给番茄的生产带来较大的经济损失。虽然,目前关于番茄中与病害相关miRNA已有研究,但是,关于番茄中与病害密切相关miRNA的研究还不系统。基于上述状况,本研究利用生物信息学方法,挖掘到番茄中与病害密切相关的miRNA,并通过生物学实验方法探究了关键miR NA的功能。首先,本研究通过搜集文献和miRBase数据库,找到了番茄中34个miRNA的表达与病害相关,采用生物信息学方法预测它们的靶基因,利用Cytoscape软件构建miRNA间的调控网络,从中筛选出13个与病害密切相关的miRNA.根据各miRNA之间关联性的大小及其与病害相关靶基因的多少,又进一步选出miR16、miR482、miR5300、 miR6024、miR6026和miR6027共6个关键miRNA,并对其进行了靶基因功能分析、启动子分析及实时定量PCR验证,为全面深入研究miRNA的作用机制奠定了基础。其次,挑出最为关键的niR482b和niR6024作为本文的重点研究对象,采用实时定量PCR技术分析了二者的组织特异性,以及在病原菌和SA胁迫下两个miRN A与其靶基因的表达模式。结果发现,两个miRNA在叶中的表达量均高于根和茎中的,且均能对上述胁迫做出响应,并与各自靶基因呈负相关。暗示这两个miRNA可能通过调控靶基因的表达进而参与番茄对逆境的胁迫响应过程。最后,为了进一步探究miR482b 和 miR6024的功能及作用机制,本文分别克隆了番茄中的MIR482b 和 MIR6024基因,成功构建了相应的过表达载体及瞬时转化体系,并获得了转基因番茄植株。经检测发现,转基因番茄中miR482b的表达量上调,其相应靶基因的表达量出现不同程度的下调,且提高了病原菌对番茄的致病能力。多项结果表明miR482b 和 miR6024可能在番茄响应逆境胁迫过程中均起着重要作用。总之,本研究通过生物信息学与生物学实验相结合的手段,预测、挖掘及鉴定了番茄中与病害密切相关的miRNA,并对其进行了相关功能分析。不仅可以加深人们对植物与病原物互作机制的了解,同时也可为番茄的抗病育种奠定基础。