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卵母细胞质量和精液质量不仅直接影响体外受精后的胚胎发育和移植效果,而且,对细胞核移植、克隆动物、转基因动物研究具有重要意义。为了提高牛卵母细胞体外受精的卵裂率和囊胚发育率,增加胚胎移植着床率,使奶牛体外生产胚胎更有效的推广应用,本研究对不同来源牛卵母细胞体外受精后的胚胎发育速度和囊胚的形成,体外受精胚移植等技术和不同个体的冷冻精液质量对体外受精后的胚胎发育质量及染色体异常发生率进行了分析和研究。结果如下:
1. 不同来源牛卵母细胞体外受精研究
本研究对活体采卵和屠宰场废弃卵巢内卵母细胞体外受精后的卵裂率、胚胎发育速度及囊胚形成率进行了研究,结果证明,屠宰场废弃卵巢所得卵母细胞体外受精后的卵裂率为63.7%,利用OPU技术所得卵母细胞的卵裂率为85%,两者之间差异显著(P<0.05)。胚胎发育速度证明,OPU的胚胎卵裂速度比屠宰场废弃牛卵巢内卵母细胞体外受精后的卵裂速度快,OPU卵母细胞体外受精48h,8-细胞期的胚胎率为41.2%,囊胚形成率为35.1%,屠宰场卵巢内卵母细胞体外授精48h后的8-细胞期胚胎率仅有26%,囊胚形成率15.6%,两者之间差异显著(P<0.05)。
2. 不同级别的卵母细胞体外受精研究
本研究对活体采卵不同级别的卵母细胞体外受精卵裂及囊胚发育情况进行比较研究。结果表明,活体采卵A、B级卵母细胞优于C级卵母细胞。
3. 胚胎移植
对28头黄牛发情第7天,移植A、B级早期囊胚36枚,3个月未发生返情的有12头,妊娠期间3头黄牛流产,分娩时难产死亡1头,存活12头。
4. 不同个体的冷冻精液体外受精研究和染色体分析
本研究对不同个体的种公牛的冷冻精液体外受精后的卵裂率和囊胚发育率进行了比较研究;同时,对体外受精胚的染色体进行分析,结果表明,冷冻精液A体外受精后的卵裂率及囊胚发育率均高于冷冻精液B,体外受精后的胚胎发育速度快,在第7天有47.8%的胚胎达到早期囊胚,说明不同个体的精子活率不同,体外受精后的卵裂率和囊胚形成率不同。两种冷冻精液体外受精后的胚胎染色体异常发生率无显著差异,在染色体异常的胚胎中,以多倍体发生率较高。