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目的：体外应用has-miRNA-29b mimics瞬时转染U251人脑胶质瘤细胞，观察其对细胞生长的影响，探讨在U251人脑胶质瘤细胞中上调miRNA-29b的表达能否抑制细胞的生长，检测细胞内增殖及凋亡相关蛋白的表达水平，初步探索miRNA-29b抑制U251人脑胶质瘤细胞生长的机制，为临床上治疗胶质瘤提供理论依据。方法：1.用Lipofectamine2000介导终浓度为100nmol/l的cel-miRNA-67mimics和has-miRNA-29b mimics体外瞬时转染的U251人脑胶质瘤细胞分别作为对照组和实验组。根据实验需要在转染miRNAmimics后不同时间点（24h，48h或72h）收取细胞，用于细胞形态学观察、MTT、流式细胞学术或Westernbloting实验。2（.1）细胞形态学观察：在倒置相差显微镜下直接观察培养板中24h、48h两组细胞的生长情况及细胞形态，比较两组细胞的差异，并拍照记录。重复3次。（2）MTT实验：四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分别检测24h、48h、72h实验组和对照组细胞在波长490nm和630nm处的吸光值OD490nm和OD630nm，用A值（A=OD490nm－OD630nm）评价细胞增殖情况。（3）流式细胞术检测细胞周期时相分布及凋亡率：PI单染法检测两组细胞48h的细胞周期，记录处于不同细胞周期时相的细胞比例；Annexin V/PI双染法测转染miRNA mimics48h后两组细胞凋亡情况，计算凋亡指数AI，AI（%）=凋亡细胞数/总细胞数×100%。实验重复5次。（4）蛋白印迹（Western blotting）实验：Western blotting检测24h、48h两组细胞周期相关蛋白CDK6、cyclinD1和凋亡相关蛋白Bcl-2、Mcl-1、Bax的表达水平，IPP6.0软件对Western条带进行定量分析。实验重复5次。3.统计学分析：所得数据资料均以均数±标准差(x±S)来表示。采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计处理，方差齐的两组间采用独立样本t检验，方差不齐则采用Wilcoxon秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果：1.细胞形态学观察：对照组U251人脑胶质瘤细胞生长状态良好，细胞贴壁生长，呈多形性，轮廓清晰，细胞间界限清楚，贴壁良好，胞体透亮，颗粒较少，细胞核清晰可见；实验组细胞24h、48h实验组U251细胞生长相对缓慢，贴壁现象减弱，肿瘤细胞失去原有多形性状态，逐渐变圆趋势，胞体轻度皱缩，胞浆内颗粒增多增粗，小部分细胞脱落死亡2. MTT实验结果：对照组和实验组细胞在24h、48h、72h的A值分别为（0.14±0.01），（0.25±0.03），（0.36±0.02）和（0.13±0.01），（0.21±0.02），（0.30±0.02），两组间各时间点差异均具有统计学意义（P<0.05），且差异在转染后72h最为明显。3.流式细胞检测结果：对照组U251细胞48h处于G1、S、G2期细胞数比值分别为（44.78±1.52）%、（50.86±1.52）%和（4.56±0.47）%；实验组分别为（57.27±2.27）%，（39.25±2.12）%，（3.46±0.44）%，两组间差异有统计学意义（p<0.05），实验组细胞周期阻滞在G1期。实验组细胞凋亡率为（14.96±1.27）%，显著高于对照组的（4.52±1.08）%（p<0.05）。4.Western bloting结果：实验组24h、48h CDK6、Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达水平较对照组减弱，Bax蛋白表达增强,cyclinD1蛋白表达量无明显变化。以上变化均以48h更为明显。结论：1、体外上调U251人脑胶质瘤细胞中miRNA-29b的表达可抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡。2、miRNA-29b抑制U251人脑胶质瘤细胞增殖的机制与抑制CDK6蛋白的表达相关，与cyclinD1蛋白的表达无直接相关。3、miRNA-29b诱导U251人脑胶质瘤细胞凋亡与抑制Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达和促进Bax蛋白的表达相关。4、miRNA-29b可能成为靶向治疗人脑胶质瘤的靶点。